Desenvolvimento de bacteria transgenica utilizando o sistema fic31 para a producao de vetores minicirculares plasmidiais

• Processo: 09/54309-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Sang Won Han
• Beneficiário: Adara Áurea dos Santos
• Instituição Sede: Centro de Terapia Celular e Molecular. Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Terapia genética
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bacteria Transgenica | Integrase Fic31 | Minicirculo Plasmidial | Terapia Genica | Vetor Nao-Viral

Resumo

A terapia gênica consiste numa estratégia terapêutica que tem por objetivo a mudança genética de uma célula alvo para tratar distúrbios herdados ou adquiridos, dessa forma, utilizam-se vetores para a introdução do transgene na célula, sendo estes virais ou não-virais. Os vetores virais são muito usados na terapia gênica, porem apresentam integração aleatória, como os retrovírus, ou são de difícil produção, como os vírus adeno-associado. Os vetores plasmidiais são um potente veículo para a terapia gênica, pois são menos imunogênicos e fáceis de manipulação. O grande entrave no uso de vetores plasmidiais é a sua baixa taxa de transfecção nas células-alvo, que se deve em uma parte o grande tamanho do plasmídeo. Dessa forma, foram desenvolvidos os vetores minicirculares, com a finalidade de diminuir o tamanho do vetor retirando as seqüências plasmidiais que silenciam a expressão do gene de interesse e diminuem as seqüências CpG. Os plasmídeos minicirculares são produzidos através do processo de recombinação sítio-especifica mediado por enzimas como a integrase ΦC31 ou a Cre recombinase. Nestes processos, o gene da integrase e do interesse são colocados no mesmo vetor plasmidial deixando o vetor muito grande. Isto gera dificuldade para construção transformação e, principalmente, a produção de minicírculos. Este projeto visa à criação de uma linhagem de bactéria derivada de E. coli MM294 para expressar a integrase ΦC31. Desta forma, para produção de minicirculo o plasmídeo parental deverá carregar apenas o cassete de expressão do gene de interesse ladeado de sequências de attB e attP e as sequências essenciais de um plasmídeo. (AU)