Genomica funcional de frango: caracterizacao funcional dos membros da familia rgm de orientadores de axonios durante o desenvolvimento da musculatura esqueletica em embrioes de gallus gallus.

• Processo: 06/06298-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Zootecnia
• Pesquisador responsável: Luiz Lehmann Coutinho
• Beneficiário: Erika Cristina Jorge
• Instituição Sede: Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALQ). Universidade de São Paulo (USP). Piracicaba , SP, Brasil
• Assunto(s): Genômica funcional
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Desenvolveiemnto Muscular | Embrioes De Frango | Genomica Funcional | Orientadores De Oxonio | Transformacoes De Embrioes | Genômica Funcional

Resumo

A molécula orientadora por repulsão (RGM-A) foi identificada como preferencialmente expressa na musculatura peitoral de frangos em ensaios de microarranjos, confirmado por RT-PCR quantitativo. A família RGM é composta por RGM-A, B e C e são conhecidas como proteínas orientadoras do crescimento das projeções de axônios. No entanto, algumas evidências sugerem um papel biológico para os membros desta família no tecido muscular esquelético: além de apresentarem padrão de expressão nos somitos, as estruturas que dão origem aos precursores moigênicos, RGM-A e C são altamente expressos neste tecido. RGM-A foi selecionado para uma análise funcional in vivo, que foi realizada na forma de estágio sanduíche supervisionado pela Dra. Susanne Dietrich, do King’s College London (Londres, Reino Unido), com auxílio do CNPq. O padrão de expressão determinado por hibridização in situ em embriões de frango indicou que RGM-A é expresso no domínio dos somitos responsável pela origem da musculatura das costas. Este padrão sugeriu que RGM-A pudesse estar associado ao modelo de determinação da separação morfológica das musculaturas epaxial e hipaxial dos vertebrados superiores, que ocorre de maneira dependente da inervação dos ramos do nervo espinal. A hipótese é que os precursores miogênicos forneçam as pistas de sobrevivência e orientação para os axônios motores em crescimento. Os fatores de transcrição En1 e Sim1 estão envolvidos com o modelo. Orientadores de axônios são candidatos a atuarem imediatamente downstream a En1 na via molecular. Uma construção de expressão para RGM-A foi introduzida nos somitos e o fenótipo de regulação negativa da expressão dos marcadores EphA4 e Pax3 foi observado, exatamente o mesmo resultado obtido com En1. Este fenótipo sugeriu um papel biológico para RGM-A no processo de formação das musculaturas epaxial e hipaxial. O objetivo deste pós-doutoramento é investigar a função biológica dos membros da família de orientadores de axônio RGM-A, B e C sobre o desenvolvimento da musculatura esquelética. Pretende-se expandir os resultados obtidos em Londres e verificar os efeitos da super-expressão e do knockdown de transcritos de RGM-A nos somitos, primeiro sobre a expressão de marcadores de diferenciação muscular, procurando sugerir um papel inédito para RGM-A durante o processo da miogênese; segundo, verificar os efeitos sobre a formação dos ramos nervosos, a fim de comprovar que RGM-A é a molécula que orienta e promove o correto contato entre os sistemas nervoso e muscular. O padrão de expressão de RGM-B em embriões de frango será investigado por HIS e biologia computacional será utilizada para investigar a existência de RGM-C no genoma do frango, ainda não identificada. A seqüência da ORF completa identificada para RGM-C será utilizada para a determinação do padrão de expressão e para promover a super-expressão nos somitos. Os efeitos também serão verificados sobre marcadores de diferenciação muscular. Este projeto de pós-doutoramento representa a oportunidade de dar continuidade aos trabalhos iniciados anteriormente, que sugeriram um inédito componente do programa miogênico, RGM-A – a associação entre um orientador de axônio e o desenvolvimento muscular ainda não foi funcionalmente caracterizada. Permitirá ainda, transferir as metodologias de análises funcionais de genes em embriões de frango, adquiridas durante o estágio realizado no exterior, para o laboratório da ESALQ-USP. Representa o estabelecimento de uma nova linha de pesquisa para o grupo, que investiu os últimos anos em genômica de frango, com a identificação e análise de ESTs e com a quantificação destes transcritos por microarranjos. RGM-A é apenas um entre os inúmeros genes candidatos ainda não-caracterizados, que vêm sendo identificados como resultados destas estratégias.