Desenvolvimento de um bioprocesso de produção do fator VIII em biorreator utilizando células humanas em suspensão: escala laboratorial

• Processo: 08/51505-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2008
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Dimas Tadeu Covas
• Beneficiário: Kamilla Swiech Antonietto
• Instituição Sede: Hemocentro de Ribeirão Preto. Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da USP (HCMRP). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 98/14247-6 - Center for Research on Cell-Based Therapy, AP.CEPID
• Assunto(s): Hemofilia A Fator VIII
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bioprocesso | Celula Animal | Cultivo Celular | Fator Viii | Hemofilia A | Proteina Recombinante

Resumo

A produção de fator VIII (FVIII) recombinante em células de mamíferos representa uma alternativa segura para o tratamento de indivíduos portadores de Hemofilia A. Atualmente no Brasil, o tratamento destinado aos hemofílicos é realizado com fatores (VIII e IX) purificados a partir do plasma de indivíduos normais, estratégia que apresenta desvantagens como risco de infecções virais e alta demanda de plasma de doadores sangüíneos normais. O objetivo principal deste projeto de pós-doutorado é desenvolver um bioprocesso de produção de fator VIII recombinante, em escala laboratorial, em biorreator utilizando uma linhagem celular de hepatócito humano que possibilite a obtenção de altas quantidades do produto recombinante. Primeiramente a linhagem celular será adaptada para o crescimento em um meio livre de soro apropriado e, em seguida, para o crescimento em suspensão em pequena escala (frascos de cultura estáticos e frascos spinner, respectivamente). Após definição de um meio de cultura adequado e adaptação ao crescimento em suspensão, serão realizados escalonamentos inicias em frascos spinner de diferentes volumes e, finalmente, cultivos em biorreator (1,3 - 3L) para a obtenção de dados cinéticos da célula e de produção do fator VIII recombinante. Ao longo do presente trabalho a produção e a qualidade biológica da proteína será avaliada utilizando técnicas como PCR em Tempo Real, Western blotting, determinação da atividade da proteína e também, alternativamente, quantificação via ELISA. Para a realização da pesquisa será utilizada a estrutura do Laboratório de Transferência Gênica da Fundação Hemocentro de Ribeirão Preto, que possui experiência consolidada na expressão do fator VIII recombinante em diferentes linhagens celulares utilizando diferentes tipos de vetores. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SWIECH, KAMILLA; KAMEN, AMINE; ANSORGE, SVEN; DUROCHER, YVES; PICANCO-CASTRO, VIRGINIA; RUSSO-CARBOLANTE, ELISA M. S.; NETO, MARIO S. A.; COVAS, DIMAS T.. Transient transfection of serum-free suspension HEK 293 cell culture for efficient production of human rFVIII. BMC Biotechnology, v. 11, NOV 24 2011. (08/51505-7)