Expressao e purificacao da enzima conversora da endotelina 1 (ec 3.4.24.71) recombinante.

• Processo: 07/51350-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2007
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
• Pesquisador responsável: Vanessa Rioli
• Beneficiário: Bruno Taborda Paes de Camargo
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Endotelinas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Endotelina | Enzimologia | Expressao Em Leveduras | Metalopeptidases

Resumo

A Enzima conversora de endotelina 1 (ECE1 - EC 3.4.24.71), uma metalopeptidase da família das neprilisinas ou M13, é uma enzima tipicamente de membrana que ativa ou inativa oligopeptideos (pro)-hormonais. Uma das funções mais relevantes atribuídas à ECE1 está relacionada ao processamento da big-endotelina (big-EDN) em um peptídeo biologicamente ativo, a EDN1. Essa conversão permite a ação deste peptídeo como potente vasoconstritor. Apesar de hoje estar claro que EDN1 possui papel primordial na proliferação celular, no reparo e no desenvolvimento de tecidos, é também evidente que este peptídeo e suas isoformas estão implicados em grande número de disfunções e processos patológicos. O presente projeto pretende iniciar o desenvolvimento de um sistema eficiente para expressão e purificação da enzima ECE1 em nosso laboratório. Propomos a utilização do sistema de expressão em leveduras (Pichia pastoris) por se tratar de um excelente sistema para expressão de genes heterólogos de interesse biotecnológico, bem como a simplicidade das técnicas necessárias para a manipulação gênica de Pichia pastoris e a habilidade já demonstrada para produzir proteínas exógenas em níveis elevados. A ECE1 expressa nesse sistema e purificada à homogeneidade aparente por cromatografia de afinidade será utilizada posteriormente em diversas análises de especificidade e busca de novos potenciais alvos terapêuticos. (AU)