Analise fenotipica de celulas de melanoma transfectadas com o dominio cauda globular da miosina-v e isolamento de proteinas ligantes.

• Processo: 97/03695-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 1997
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 1999
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Alexandra Aparecida da Cunha Nascimento
• Beneficiário: Alexandra Aparecida da Cunha Nascimento
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Transfecção Melanócitos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Melanocitos | Miosina-V | Proteinas Ligantes De Miosinas | Transfeccao

Resumo

Recentemente, grande interesse e esforço tem se voltado no sentido de desvendar os papéis celulares dos diversos membros da superfamília das miosinas, o que requer conhecimentos das propriedades bioquímicas, biofísicas e estruturais desses motores, de sua localização e regulação in vivo e da identidade das proteínas que interagem com os mesmos. As miosinas V constituem-se em uma classe emergente de miosinas não convencionais, possivelmente envolvida no transporte de vesículas e organelas. Os objetivos principais deste projeto consistem em se obter um recombinante codificando o domínio cauda globular da miosina-V em vetor específico para expressão em células de mamífero e transfectar células de melanoma de camundongo com esta construção, seguido de análise da expressão da proteína recombinante, de sua distribuição sub-celular e do fenótipo das células transfectadas. Além disso, experimentos complementares envolvendo imunoprecipitação poderão revelar proteínas ligantes da cauda. A importância deste projeto se justifica em razão do crescente interesse em se identificar proteínas que interagem com as diversas miosinas conhecidas, proteínas receptoras ou de ancoramento, por exemplo, as quais postula-se interagirem com o domínio cauda desses motores, desempenhando um papel na sua localização sub-celular e podendo, dessa forma, contribuir para o controle geral da função dos mesmos. Os estudos aqui propostos visam esclarecer a localização sub-celular e revelar possíveis proteínas que interagem com a miosina-V. Além disso, a super-expressão do domínio cauda globular em células que já expressam altos níveis desta miosina poderá gerar um fenótipo dominante negativo, o qual seria elucidativo no esclarecimento da função deste domínio. (AU)