Desenvolvimento de um sistema para integração estável de genes heterólogos em linhagens atenuadas de Salmonella

• Processo: 96/08054-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 1997
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 1998
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Marcelo Brocchi
• Beneficiário: Marcelo Brocchi
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Salmonella Vacinas Expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Expressao | Phon | Salmonella | Vacinas

Resumo

Linhagens de Salmonella sp atenuadas com relação à virulência, são utilizadas como carregadoras de diferentes determinantes antigênicos para o sistema retículo-endotelial (SRE) sendo capazes, em muitos casos, de induzir efetiva resposta imunológica contra tais antígenos (Cárdenas e Clements, 1992; Curtiss et al., 1994). Estas linhagens são potenciais candidatas para o desenvolvimento de vacinas bivalentes. A estabilidade da expressão do antígeno heterólogo "in vivo" é uma característica importante na construção de linhagens recombinantes de Salmonella (Hone et al., 1988). Uma forma de estabilização é a integração destes genes heterólogos no cromossomo bacteriano. Vários métodos envolvendo recombinação homóloga em diferentes seqüências do cromossomo foram propostos (Hone et al., 1988; Strugnell et al., 1990). Muitos destes, senão todos envolvem a utilização de passos intermediários de eliminação de plasmídios ou marcas de resistência a antibióticos. Neste projeto, estamos propondo a construção de um sistema de expressão e recombinação para linhagens δcya δcrp δasd de S. typhimurium usando o gene phoN como alvo e o gene asd, que codifica a enzima Aspartato-β-semialdeido desidrogenase, para a seleção de bactérias recombinantes. Tal sistema poderá " ser utilizado com qualquer linhagem de Salmonella auxotrófica para Asd. O gene phoN codifica uma fosfatase ácida não específica e sua expressão é controlada a nível transcricional pelo locus phoP/phoQ. Estes últimos genes codificam proteínas regulatórias essenciais para a sobrevivência de Salmonella no interior dos fago-lisossomos dos macrófagos (Véscovi et al., 1994). A transcrição de phoN é ativada, no interior dos macrófagos, por PhoP mas, diferente de outros genes ativados por PhoP, mutações em phoN não alteram a virulência de Salmonella e a sobrevivência desta no interior de macrófagos (Vescovi et al., 1994). Mutações em phoN podem ainda ser acompanhadas fenotipicamente, através da incapacidade de mutantes PhoN- em metabolizar o composto 5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato (X-P), o que facilita o processo de seleção das linhagens recombinantes. (AU)