| Processo: | 92/00704-0 |
| Linha de fomento: | Bolsas no Brasil - Mestrado |
| Vigência (Início): | 01 de abril de 1993 |
| Vigência (Término): | 31 de março de 1994 |
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas - Bioquímica |
| Pesquisador responsável: | Pio Colepicolo Neto |
| Beneficiário: | Camila Balsamo Ramalho |
| Instituição-sede: | Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil |
| Assunto(s): | Expressão de proteínas Gonyaulax polyedra Nitrato redutase Relógios biológicos |
Resumo Os ritmos biológicos persistem sob condições constantes por várias semanas. Em G. palyedra sobre a qual focalizamos nosso trabalho, a expressão circadiana da bioluminescência, divisão celular e fotossíntese são controlados peto relógio biológico. Mostramos recentemente que várias enzimas, em Gonyarder, variam suas atividades. Nitrato redutase (NaR) tem sua expressão ocorrendo exclusivamente no período diurno celular. Isolaremos e caracterizaremos a HaR e geraremos anticorpos policlonais (abNaR) contra a mesma. De posse de abNaR trabalharemos nas seguintes etapas de trabalho: 1. determinação da existência ou não da oscilação circadiana proteica de NaR, similar à atividade específica por técnicas de "Western blot", 2. imunolocalização intracelular de NaR por técnicas de imunofluorescência, 3. isolamento e purificação por afinidade do mRNA, 4. "in vitro translation" de NaR e 5. construção da biblioteca cDNA diurna e clonagem de NaR utilizando abNaR e oligonucleotídeos sintéticos de domínio flavínico e do Heme. (AU) | |