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Bases moleculares dos relógios biológicos, expressão circadiana de nitrato redutase das algas unicelulares Gonyaulax polyedra e Pyrocystis lunula

Processo: 92/00704-0
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de abril de 1993
Vigência (Término): 31 de março de 1994
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica
Pesquisador responsável:Pio Colepicolo Neto
Beneficiário:Camila Balsamo Ramalho
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Expressão de proteínas   Gonyaulax polyedra   Nitrato redutase   Relógios biológicos

Resumo

Os ritmos biológicos persistem sob condições constantes por várias semanas. Em G. palyedra sobre a qual focalizamos nosso trabalho, a expressão circadiana da bioluminescência, divisão celular e fotossíntese são controlados peto relógio biológico. Mostramos recentemente que várias enzimas, em Gonyarder, variam suas atividades. Nitrato redutase (NaR) tem sua expressão ocorrendo exclusivamente no período diurno celular. Isolaremos e caracterizaremos a HaR e geraremos anticorpos policlonais (abNaR) contra a mesma. De posse de abNaR trabalharemos nas seguintes etapas de trabalho: 1. determinação da existência ou não da oscilação circadiana proteica de NaR, similar à atividade específica por técnicas de "Western blot", 2. imunolocalização intracelular de NaR por técnicas de imunofluorescência, 3. isolamento e purificação por afinidade do mRNA, 4. "in vitro translation" de NaR e 5. construção da biblioteca cDNA diurna e clonagem de NaR utilizando abNaR e oligonucleotídeos sintéticos de domínio flavínico e do Heme. (AU)