Bases moleculares dos relógios biológicos, expressão circadiana de nitrato redutase das algas unicelulares Gonyaulax polyedra e Pyrocystis lunula

• Processo: 92/00704-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 1993
• Data de Término da vigência: 31 de março de 1994
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica
• Pesquisador responsável: Pio Colepicolo Neto
• Beneficiário: Camila Balsamo Ramalho
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Expressão de proteínas Gonyaulax polyedra Nitrato redutase Relógios biológicos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Expressao De Proteina | Gonyaulax Polyedra | Nitrato Redutase | Pyrocystis Lunula | Relogio Biologico

Resumo

Os ritmos biológicos persistem sob condições constantes por várias semanas. Em G. palyedra sobre a qual focalizamos nosso trabalho, a expressão circadiana da bioluminescência, divisão celular e fotossíntese são controlados peto relógio biológico. Mostramos recentemente que várias enzimas, em Gonyarder, variam suas atividades. Nitrato redutase (NaR) tem sua expressão ocorrendo exclusivamente no período diurno celular. Isolaremos e caracterizaremos a HaR e geraremos anticorpos policlonais (abNaR) contra a mesma. De posse de abNaR trabalharemos nas seguintes etapas de trabalho: 1. determinação da existência ou não da oscilação circadiana proteica de NaR, similar à atividade específica por técnicas de "Western blot", 2. imunolocalização intracelular de NaR por técnicas de imunofluorescência, 3. isolamento e purificação por afinidade do mRNA, 4. "in vitro translation" de NaR e 5. construção da biblioteca cDNA diurna e clonagem de NaR utilizando abNaR e oligonucleotídeos sintéticos de domínio flavínico e do Heme. (AU)