Clonagem, expressão e mutagênese sítio-dirigida do fragmento ECD-disintegrina, da jararagina em vetores de Escherichia coli

• Processo: 00/11732-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2001
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2003
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Ana Maria Moura da Silva
• Beneficiário: Diego Alberto Butera Wadsworth
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Clonagem | Disintegrinas | Expressao | Integrinas | Metaloproteinases | Mutagenese

Resumo

Entre os componentes do venenos viperídeos que inibem a agregação plaquetária pelo bloqueio de integrinas, estão as disintegrinas que se ligam à integrina alfallbbeta3 e as hemorraginas que inibem a integrina alfa2 betai As primeiras apresentam um motivo RGD, contido num "loop", essencial para a atividade biológica, enquanto as bloqueadoras de alfa2beta1 apresentam um domínio tipo disintegrina com a seqüência ECD na posição da RGD das disintegrinas clássicas. O conhecimento da estrutura responsável pela ligação à integrina alfa2 betai, também presente em células endoteliais, seria de grande utilidade no desenvolvimento de ferramentas biológicas e de bloqueadores de processos patológicos. Com esta finalidade-focalizamos nossos objetivos no estudo dos resíduos envolvidos na ligação da jararagina, uma hemorragina do veneno de Bothrops jararaca, com a integrina alfa2betal Durante a etapa do mestrado, clonamos e expressamos o peptídeo ECD-disintegrina, jar49, correspondente à região de 49 resíduos da jararagina, análoga as menores RGD-disintegrinas como a eristostatina e echistatina. No doutorado, pretendemos analisar os resíduos da jar49 importantes nessa ligação, inserindo o "loop" que contém a seqüência ECD da jar49 na estrutura da eristostatina, também clonada e expressa durante o mestrado, e também alterando os aminoácidos do "loop" e adjacentes. Os mutantes serão então avaliadas quanto à especificidade e afinidade pelas integrinas. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

WADSWORTH, Diego Alberto Butera. Caracterização de disintegrinas de venenos viperídeos como ferramentas seletivas na detecção ou inibição da função de integrinas. 2003. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Conjunto das Químicas (IQ e FCF) (CQ/DBDCQ) São Paulo.