Caracterização de células da granulosa e de fibroblastos fetal e adulto de bovinos da raça Nelore como fontes doadoras de núcleos na reconstrução de embriões

• Processo: 01/13944-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2002
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2005
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: José Antonio Visintin
• Beneficiário: Heloisa Vasconcellos Amaral Caetano
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Celula Da Granulosa | Embriao Bovino | Fibroblasto | Reconstrucao Nuclear | Telomerase | Telomero

Resumo

As células da granulosa e os fibroblastos feto oriundos do matadouro e de animal adulto da raça Nelore serão utilizadas como fontes doadoras de núcleos na reconstrução de embriões. As culturas das células serão caracterizados quanto à morfologia estrutural, ultra-estrutural e imunocitoquímica (Experimente I). As culturas primárias de fibroblastos serão marcadas positivamente por vímentina e negativamente por citoqueratina e as células da granutosa marcadas positivamente por citoqueratina. Para a reconstrução dos embriões serão utilizados oócitos de ovários colhidos em matadouro, maturados in vitro e enucleados. As células da granulosa ou fibroblastos serão inseridos sob as zonas pelúcidas dos oócitos enucleados e os complexos citopfasma receptor-núcleo doador (CCN) efetrofundidos. Após a eletrofusão, os oócitos reconstruídos serão ativados quimicamente e mantidos na estufa por 4h. Em seguida, os embriões reconstruídos e ativados (Experimentos II), assim como os não manipulados (Controle), serão co-cultivados com células da granulosa bovina, para avaliar o desenvolvimento embrionário. Os embriões que alcançarem o estádio de blastócito serio avaliados quanto ao comprimento do tefômero e a atividade da telomerase ou transferidos para receptoras sincronizadas, sendo o diagnóstico de prenhes realizado por ultra-som aos 30 dias de gestação. (AU)