Clonagem e expressão funcional de fatores dermonecróticos e hemolíticos do veneno de Loxosceles laeta

• Processo: 02/03107-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2002
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2004
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunoquímica
• Pesquisador responsável: Denise Vilarinho Tambourgi
• Beneficiário: Matheus de Freitas Fernandes Pedrosa
• Instituição Sede: Instituto Butantan. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Biblioteca genômica Loxosceles laeta Venenos de aranha Clonagem Necrose Pele Hemolíticos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biblioteca Cdna

Resumo

Dá-se o nome de loxoscelismo, aos sinais e sintomas clínicos induzidos pelo veneno da aranha do gênero Loxosceles. Loxosceles laeta é a principal espécie causadora de loxoscelismo na América do Sul. O loxoscelismo é caracterizado principalmente por um quadro dermonecrótico, febre, mal-estar, podendo esse quadro evoluir para o desenvolvimento sistêmico, com o aparecimento de hemólise intravascular, com posterior comprometimento da função renal, a principal causa de óbitos. Utilizando-se das ferramentas da tecnologia do DNA recombinante, uma biblioteca de cDNA foi construída e parcialmente analisada, com o objetivo de se conhecer o repertório de toxinas contido na glândula da aranha Loxosceles laeta. A partir da estratégia de "Expressed Sequence Tag" (EST) de clones aleatórios da biblioteca de cDNA, identificamos três clones diferentes(H10, H13, H17) que codificam proteínas com similaridade significante ao nível de sequências N-terminal de esfingomielinases P1 e P2 de L. intermédia. O clone H17 foi amplificado e expresso em sistema bacteriano. A toxina expressa foi identificada, purificada e testada quanto à atividade dermonecrótica. Estes resultados foram revelados durante a execução do projeto de mestrado. A proposta deste projeto é dar continuidade ao trabalho durante o doutorado para uma análise mais detalhada da biblioteca construída, seleção de mais clones de interesse, expressão das toxinas recombinantes e análise das atividades biológicas das mesmas. (AU)