Efeitos biologicos da super-expressao de pif (proteolyis-inducing factor) durante o crescimento e diferenciacao de celulas normais e transformadas.

• Processo: 02/11297-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2003
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2005
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Bioquímica e Molecular
• Pesquisador responsável: José Ernesto Belizario
• Beneficiário: Cibely Cristine Fontes de Oliveira
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Citocinas Degradação de proteínas Caquexia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Caquexia | Citocinas | Degradacao De Proteinas

Resumo

O PIF (proteolyis-inducing factor) é uma glicoproteína encontrada no plasma de pacientes com câncer e caquexia que foi inicialmente reconhecida pela sua atividade na indução de degradação proteínas musculares durante a caquexia neoplásica. Em estudos prévios em nosso laboratório, o gene da proteína PIF isolado de uma biblioteca de células da pele e medula óssea PIF foi clonado no plasmídeo pcDNA 3.1 que contém gene da aminoglicosídeo fosfotransferase que confere resistência à neomicina. O principal objetivo desse projeto é isolar clones de células normais e transformadas que super expressem o gene da proteína PIF. Para esse fim, o plasmídio pcDNA com o gene PIF será transfectado nas linhagens de células HeLa-S3 (tumor de origem epitelial humana), C2C12 (mioblasto indiferenciado de camundongo), B-16 (melanoma de camundongo) e A-31 (fibroblasto normal de camundongo 3T3). A seleção e o isolamento dos clones será feita tratando as culturas com o antibiótico geneticina. Durante e após a seleção dos clones que expressam RNA mensageiros e as formas glicosiladas de PIF serão investigados os efeitos da expressão transiente e constitutiva de PIF na ativação de enzimas proteolítica (caspase e sistema ubiquitina-proteasoma) proliferação, diferenciação (expressão miosina de cadeia pesada) e morte celular. (AU)