Estudo da regulação da expressão do gene taça durante o desenvolvimento de Caulobacter crescentus

• Processo: 97/00121-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 1997
• Data de Término da vigência: 31 de março de 1999
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
• Pesquisador responsável: Marilis Do Valle Marques
• Beneficiário: Maria Augusta Machado
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Fator sigma Biogênese Transcrição genética Expressão gênica Caulobacter
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Caulobacter | Desenvolvimento | Fator Sigma | Transcricao

Resumo

Em Caulobacter crescentus, o fator alternativo sigma 54 controla a biogênese do flagelo, a formação do talo e também está envolvido no controle do ciclo celular. A transcrição mediada por sigma 54 depende de proteínas ativadoras distintas que se ligam aos promotores. O gene tacA, isolado recentemente pelo nosso grupo (Marques et al., 1996), codifica uma proteína que possui todas as características estruturais de um ativador de transcrição de promotores sigma 54, sendo sua expressão regulada durante o ciclo de vida da bactéria. Este controle da expressão de tacA é exercido principalmente no nível de transcrição, sendo que o pico de transcrição deste gene ocorre na célula pré-divisional. O objetivo principal deste projeto é determinar quais seqüências específicas do promotor de tacA são responsáveis pelo controle temporal da expressão deste gene. Isto será feito através de mutações sítio-dirigidas em que faremos substituições de bases na região promotora, e analisaremos o padrão de expressão destas construções utilizando genes repórteres. Uma análise preliminar das seqüências presentes no promotor de tacA mostrou que nesta região há várias repetições de uma seqüência conservada reconhecida pelo fator CtrA. O envolvimento da proteína CtrA na expressão de tacA será analisada, utilizando esta proteína recombinante expressa em E. coli, em ensaios de "gel mobility shift" e "footprinting". Também será estudada a expressão do gene tacA em uma linhagem mutante de Caulobacter que não possui a proteína CtrA. (AU)