Mapeamento de elementos de transicao do gene pbgp43 que codifica um antigeno majoritario de paracoccidioides brasiliensis.

• Processo: 03/03485-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2003
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2005
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
• Pesquisador responsável: Rosana Puccia
• Beneficiário: Antonio Augusto Rocha
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Elementos de transição Paracoccidioides brasiliensis
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Elementos De Transicao | Gene Pbgp43 | P.Brasiliensis

Resumo

A gp43 de Paracoccidioides brasiliensis é o principal antígeno diagnóstico e prognóstico da paracoccidioidomicose humana, candidato a vacina e/ou agente imunoterápico e um potencial fator de virulência devido às suas propriedades de adesina. Nosso laboratório tem tradição no estudo molecular da gp43 e do seu gene, e temos intenção de conhecer os mecanismos envolvidos na regulação do transcrito. Este projeto tem como objetivo imediato continuar os estudos sobre elementos de transcrição iniciados no laboratório. Em 326 pb da região 5'UTR do gene foi detectado pelo menos um elemento de transcrição na seqüência TGCAGAT/ATTATCAACAATTATG/CC, através de EMSA ("electrophoretic mobilty shift assay"). Os elementos de choque térmico putativo que alberga são provavelmente não funcionais, já que a expressão do PbGP43 não aumentou após choque térmico a 42oC em 2 isolados e, em outro, o gene (mais polimórfico) foi reprimido. Na transição micélio-levedura-micélio, há um pico na expressão do PbGP43, sugerindo um papel do antígeno no dimorfismo, mas o perfil de expressão variou com o isolado. Pretende-se mapear o elemento de transcrição na seqüência mencionada e encontrar outros na região conhecida e "upstream" a ela, que deverá ser clonada e seqüenciada. Serão usados ensaios de EMSA e de proteção de nuclease. Será padronizado um protocolo para extração de proteínas nucleares do fungo. (AU)