Clonagem em equinos atraves de transferencia nuclear utilizando-se celulas de animal adulto como doadoras de nucleo.

• Processo: 04/00822-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2004
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Fernanda da Cruz Landim
• Beneficiário: Claudia Barbosa Fernandes
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Clonagem Equinos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Ativacao Nuclear | Clonagem | Equinos

Resumo

Este experimento tem como objetivo geral criar, no Laboratório de Fertilização in vitro da FMVZ - UNESP, condições para a produção, no Brasil de eqüídeos clonados. Para tanto neste experimento serão utilizados fibroblastos de animais adultos, bem como células do cumulus como doadores de núcleo. Como citoplasma receptor serão utilizados ovócitos obtidos de ovários de abatedouro, os quais serão submetidos ao processo de maturação in vitro. Alem destes também serão utilizados ovócitos maturados in vivo, obtidos de folículos pré-ovulatórios através de aspiração trans-vaginal. Os ovócitos totalmente desnudos serão penetrados com uma pipeta com 20 nm de diâmetro interno, utilizando-se um micromanipulador, para retirada do primeiro corpúsculo polar e o citoplasma adjacente contendo a placa metafásica. A célula doadora de núcleo será então colocada no espaço perivitelínico e o conjunto transferido para uma solução a 0,3 M de D-manitol, contendo 0,5 mM de HEPES e 0,05% de Soro albumina bovina. Imediatamente após a TN e a ativação utilizando-se a lonomicina sozinha, associada ao ciclohexemide ou ao estrôncio. Os embriões produzidos serão coradas com 10 mg/ml de Hoechst 33342. Para análise do número de núcleos utilizado a análise de variância ANOVA, seguida do teste "T" de Student. (AU)