Caracterização de células T gamma-delta e natural killer na imunoterapia da tuberculose experimental com a vacina gênica DNAhsp65

Autor(es)

Luana Silva Soares

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Ribeirão Preto.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (PCARP/BC)
• Data de defesa: 2011-12-12

Membros da banca

Celio Lopes Silva; Kelen Cristina Ribeiro Malmegrim de Farias; Anderson de Sá Nunes

• Orientador: Celio Lopes Silva

Resumo

Em 1993, a Organização Mundial da Saúde declarou a tuberculose (TB) como uma emergência global devido à sua relevância epidemiológica e a necessidade de seu controle. Atualmente, a TB ainda é considerada um problema de saúde pública e requer o desenvolvimento de vacinas e terapias que sejam mais eficazes na sua prevenção e tratamento. Nesse sentido, o Laboratório de Vacinas Gênicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto estuda há mais de dez anos a eficácia da vacina gênica DNAhsp65 na profilaxia e terapia da TB. Com o intuito de complementar o conhecimento existente sobre os mecanismos imunes desencadeados pela vacina DNAhsp65, assim como sua associação às drogas convencionais utilizadas no tratamento da TB, objetivou-se neste trabalho a caracterização de células natural killer (NK), T natural killer (NKT), e T ?? na imunoterapia da tuberculose experimental com a vacina DNAhsp65, no tratamento com as drogas rifampicina (RIF) e isoniazida (INH), e na associação DNAhsp65-drogas. Inicialmente, camundongos BALB/c foram infectados com Mycobacterium tuberculosis (Mtb) cepa H37Rv no dia 0 e nos dias 1, 7, 15, 30 e 70 após a infecção, foi promovida a eutanásia dos animais infectados ou não (controle) para análise das células T não convencionais no pulmão por citometria de fluxo. No dia 30 após a infecção, os animais infectados receberam os diferentes tratamentos: vacina DNAhsp65, vetor pVAX1, drogas RIF e INH, ou as drogas em associação à vacina. Dez dias após o fim dos tratamentos, foi promovida a eutanásia dos animais para análise das populações celulares no pulmão e linfonodo por citometria de fluxo, imunohistoquímica e PCR em tempo real. Os animais somente infectados com Mtb apresentaram aumento significativo no número das células NK (CD3-CD49b+), NKT (CD3+CD49b+) e T ?? (CD3+??+) logo na primeira semana após a infecção, e esta diferença em relação aos animais controle permaneceu em até 70 dias após a infecção. Entre as células NK presentes no pulmão, observou-se predominância da subpopulação CD11bhighCD27low em todos os animais. Nos animais infectados, verificou-se aumento significativo das subpopulações de NK: CD11bhighCD27high e CD11blowCD27high, nos dias 7 e 15 e somente no dia 15 após a infecção, respectivamente. Entre a população de células T ?? presentes no pulmão, houve predomínio do fenótipo CD27- em animais controles e infectados nos diferentes tempos experimentais. Quanto aos animais infectados com Mtb e tratados com DNAhsp65, verificou-se aumento significativo de células T ?? produtoras de IFN-? e IL-17 no pulmão, e apesar de não ter sido observada diferença na freqüência de células NK e NKT neste grupo, as células NK apresentavam maior expressão da molécula FasL relacionada à morte celular induzida por apoptose. Nos grupos drogas e DNAhsp65-drogas observou-se aumento da freqüência de células T ?? no pulmão, assim como aumento de células NK produtoras de IL-10 e que expressavam o marcador de ativação CD69. Os resultados deste trabalho mostram mais uma vez a eficácia da vacina DNAhsp65 e da associação DNAhsp65- drogas no tratamento de animais infectados com Mtb e sugerem que células T não convencionais como as células NK, NKT e T ?? podem participar na modulação da resposta immune na TB. Estes achados devem ser levados em consideração no desenho de novas estratégias terapêuticas e também profiláticas para a TB. (AU)

• Processo FAPESP: 09/04544-0 - Caracterização de células T gamma-delta e Natural Killer na imunoterapia da tuberculose experimental com a vacina gênica DNAhsp65.
• Beneficiário: Luana Silva Soares
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado