Estudo do promotor do gene da cadeia alfa 2 do colageno tipo I em portadores de fibromatoge gengival hereditaria

Autor(es)

Raquel Fernanda Gerlach

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Piracicaba, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Odontologia de Piracicaba
• Data de defesa: 1998-02-17

Membros da banca

Sergio Roberto Peres Line; Fausto Marchi; Lourenço Bozzo

• Orientador: Sergio Roberto Peres Line

Resumo

Há grande variação interindividual de fibroblastos gengivais em relação à síntese de proteínas da matriz. Esta variabilidade está bem documentada em casos de reação fibrótica gengival induzida por drogas, mas o mesmo não acontece em relação à Fibromatose Gengival Hereditária (FGH), condição em que há aument9 da secreção de colágeno normal na matriz extracelular. Condições particulares individuais como polimorfismos genéticos ou mutações podem influir na resposta de fibroblastos a estímulos do ambiente. Assim, procuramos identificar polimorfismos na região do promotor da cadeia alfa 2 do colágeno tipo 1 (COLIA2) em um grupo de pacientes normais (n=12) e outro de portadores de FGH (n=13). Além disso, também testamos a hipótese de alteração no padrão de metilação destaseqüência estar relacionada ao aumento da expressão do colágeno do tipo I em portadores de FGR. Primeiramente foi feita a amplificação por PCR da região do promotor da cadeia alfa 2 do colágeno entre -340 e +2 pares de base(bp), porção do promotor que possui mais seqüências reconhecidas como determinantes na interação com fatores de transcrição. A ste passo se seguiu a análise de heteroduplexes para a identificação de polimorfismos. Esta análise foi feita do seguinte modo: aquecimento das amostras a 98°C por 5 minutos, resfi-iamento a O°C e manutenção a 20°C por uma hora. A detecção de heteroduplexes foi feita em gel de poliacrilamida a 6%/ Tampão TBE, corado pelo método da prata. A análise de metilação foi feita através do uso de enzimas de restrição (HAL In e HP A n, que não clivam as suas seqüências de reconhecimento de DNA quando estas seqüências estiverem metiladas). Previamente à reação de PCR, o DNA foi digerido com as enzimas citadas. A metilação permitiria a amplificação da seqüência de DNA que estivesse metilada entre as regiões dos primers utilizados. Após a amplificação, as amostras foram submetidas a eletroforese em gel de poliacrilamida a 6%/ Tampão TBE, corado pelo método da prata.Não houve diferença na migração dos fi-agmentos' de DNA após a reação de heteroduplexes, nem foi detectada alteração no padrão de metilação entre os dois grupos de indivíduos. Estes achados indicam que mutações ou alteração no padrão de metilação da região do promotor do COLIA2 compreendida entre -340 e +2 bp provavelmente não estejam relacionadas ao crescimento gengival de portadores de FGR (AU)

• Processo FAPESP: 96/01769-9 - Analise de polimorfismo da regiao promotora do gene da cadeia alfa 2 do colageno tipo i em pacientes portadores de fibromatose gengival hereditaria.
• Beneficiário: Raquel Fernanda Gerlach
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado