Analise da privação de fosfato em Acidithiobacillus ferrooxidans

Autor(es)

Fabio Henrique Pfeilsticker de Knegt

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2004-10-20

Membros da banca

Laura Maria Mariscal Ottoboni; Maria Ines Zanoli Sato; Suzete Aparecida Lanza Destéfano

• Orientador: Laura Maria Mariscal Ottoboni

Resumo

Acidithiobacillus ferrooxidans é uma bactéria Gram-negativa, de metabolismo diazotrófico, estritamente autotrófico e quimiolitotrófico que pode utilizar Fe2+ e SO como doadores de elétrons em sua respiração celular. A. ferrooxidans possui importância econômica, uma vez que um dos microrganismos envolvidos no processo de biolixiviação, processo em que metais existentes em minérios na forma de compostos insolúveis são solubilizados pela ação de comunidades de microrganismos. O fosfato é um nutriente que pode limitar o crescimento de A. ferrooxidans em ambientes de biolixiviação. A despeito disto, pouco se sabe a respeito das respostas molecular e morfológica desta bactéria ao estresse de privação deste nutriente. A linhagem brasileira A. ferrooxidans LR foi utilizada para o estudo de genes expressos diferencialmente e de alterações morfológicas de células cultivadas em condições de privação de fosfato. Foram feitos experimentos de curva de crescimento em várias concentrações de fosfato. Com base nestes experimentos foram escolhidas as condições para a realização de experimentos de RAP-PCR. A confirmação da expressão diferencial dos cDNAs isolados foi realizada por slot blot de DNA. Os cDNAs com maiores coeficientes de expressão foram c1onados e seqüenciados. A análise das seqüências mostrou que três cDNAS apresentaram similaridade significativa com a enzima 3,4-dihidroxi-2-butanona 4-fosfato sintase (DHBP sintase - RibB) e com o domínio DHBP sintase de enzimas bifuncionais que possuem um domínio DHBP sintase e outro GTP cic1ohidrolase 11 (RibBA). Estas enzimas estão envolvidas na síntese de riboflavina. A análise da seqüência genômica de A. ferrooxidans revelou que esta bactéria possui genes para ambas enzimas e que o cDNA c1onado correspondia ao gene ribB. O gene ribBA, amplificado a partir do DNA genômico de A. ferrooxidans LR, foi c1onado e seqüenciado. Outro cDNA apresentou similaridade significativa com proteínas heat shock da super-família a-HSP. A análise do genoma não anotado de A. ferrooxidans indicou a presença de outras duas prováveis ORFs que codificam a-HSPs. A expressão dos cDNAs e do gene ribBA foi analisada em várias condições de estresse através de slot blot de RNA. A morfologia de A. ferrooxidans LR foi analisada através de microscopia de força atômica (AFM). Células de A. ferrooxidans cultivadas em meio sem fosfato sofrem drásticas alterações em sua superfície. As células crescidas em condições controle possuíam superfícies lisas, ao passo que células submetidas à privação de fosfato apresentaram superfícies irregulares. As células cultivadas em meio sem fosfato são mais largas e em média três vezes maiores que células cultivadas nas condições controle (AU)

• Processo FAPESP: 01/12517-0 - Identificacao e caracterizacao de genes em acidithiobacillus ferrooxidans submetida ao estresse induzida pela privacao de fosfato.
• Beneficiário: Fabio Henrique Pfeilsticker de Knegt
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado