Quantificação do fator de crescimento semelhante a insulina I (IGF-I) em plasma bovino por ELISA

Autor(es)

Marcos Antonio Maioli

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Araçatuba. 2016-02-17.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Faculdade de Medicina Veterinária. Araçatuba
• Data de defesa: 2016-02-01
• Orientador: Guilherme de Paula Nogueira

Resumo

Esse estudo teve como objetivo a padronização de um ensaio imunoenzimático (ELISA) para a determinação das concentrações plasmáticas de IGF-I total, utilizando o sistema de amplificação biotina-estreptavidina peroxidase em um ensaio competitivo. O IGF-I foi extraído da IGFBP, utilizando o tampão glicina acidificado seguido de neutralização do pH com hidróxido de sódio. As microplacas foram sensibilizadas com anti IgG de coelho, e as dosagens realizadas utilizando duas abordagens, um método sem competição (incubação prévia das amostras com o anticorpo anti-h-IGF-I) e outro com competição (adição simultânea de IGF-I biotilinado e amostra). Os melhores resultados foram obtidos utilizando o método competitivo, com a sensibilização da placa com 0,25 μg/poço de IgG anti-coelho, o anticorpo específico na diluição 1:250.000 e 0,06 ng/poço de IGF-I biotinilado. O ensaio in house apresentou, um limite inferior de detecção de 50 ng/mL, uma correlação de 0.945 entre doses quando comparado à uma metodologia comercial. Além disso, após 33 ensaios (1114 amostras) a metodologia apresentou uma boa precisão, com coeficientes de variação inter-ensaio de 12,94% (345,8 ng/mL) para os controles alto e 20,71% (131,6 ng/mL) para o baixo. Dessa forma, conclui-se que a metodologia imunoenzimática para quantificação de IGF-I total utilizando o sistema de amplificação biotina-estreptavidina peroxidase em um ensaio competitivo está estabelecida e apresenta-se como uma ferramenta útil para estudos que visem o monitoramento das concentrações de IGF-I. (AU)

• Processo FAPESP: 14/09135-9 - Padronização da quantificação do fator de crescimento semelhante à insulina I (IGF-I) por radioimunoensaio e acompanhamento das alterações da concentração do hormônio durante o desenvolvimento de novilhas Nelore submetidas a diferentes regimes alimentares
• Beneficiário: Marcos Antonio Maioli
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado