Caracterização do perfil de interação da proteína cinase humana NEK3 e sua contextualização funcional

Autor(es)

Vanessa Bomfim Cardoso

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2016-10-26

Membros da banca

Jörg Kobarg; Marcio Vinicius Bertacine Dias; Celso Eduardo Benedetti; Andrea Balan; Patricia da Silva Melo

• Orientador: Jörg Kobarg

Resumo

NEKs (NIMA-related kinases) são um grupo de proteínas cinases que compartilham alta identidade entre suas sequências de aminoácidos na região do domínio cinase com a proteína NIMA (Never in mitosis gene A) e estão envolvidas na regulação do ciclo celular. Dentre as NEKs já estudadas, funções frequentemente encontradas incluem: funcionamento dos cílios, progressão do ciclo celular ¿ principalmente durante os "checkpoints" ¿ e a resposta a danos no DNA. Até o presente momento, 11 NEKs humanas foram descobertas no genoma, com os seus ortólogos presentes em camundongos. NEK3 é uma serina/treonina cinase de 506 aminoácidos, presente no citoplasma e no núcleo, com o seu gene humano localizado no cromossomo 13, região q14.2. Em função das correlações entre NEK3 e diversas patologias e processos, tais como o câncer de mama, degeneração axonal, e por seu gene estar localizado em uma região de freqüentes mutações, tornam-se necessários maiores esclarecimentos de como ocorre a sua participação, através de estudos funcionais, moleculares e estruturais, buscando mapear a rede de interações na qual ela está envolvida. Utilizando o Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid system, uma triagem para a busca de parceiros de interação foi realizada e 65 clones encontrados, que codificam 27 proteínas diferentes foram identificados. Os interatores identificados estão envolvidos em diversos processos celulares tais como sumoilação, ubiquitinação, regulação da transcrição, reparo de DNA, processamento de RNA e a regulação da proliferação celular, invasividade e metástase. Alguns parceiros de interação da NEK3 estão localizados no núcleo e membrana plasmática, mas a maioria está presente no citoplasma. Um dos interatores citoplasmáticos, RhoGDI2, é um regulador das RhoGTPases e inibe a ativação de ambas Rac1 e RhoA. Em nosso ensaio de pull down, a superexpressão de NEK3 aumenta os níveis de Rac1-GTP enquanto a superexpressão concomitante com RhoGDI2 reduz Rac1-GTP a níveis não detectáveis. Nossos dados sugerem que a interação de NEK3 com RhoGDI2 é um importante elemento regulador da sinalização de Rac1. Ademais, o papel da NEK3 no ciclo celular também foi investigado em células depletadas para NEK3 que apresentaram um atraso da citocinese causada por pontes citoplasmáticas e de DNA, que corrobora com o papel de outros interatores de NEK3 e confirma a importância dos resultados apresentados neste trabalho (AU)

• Processo FAPESP: 11/06730-5 - Clonagem e expressão da proteína cinase Nek3 humana visando estudos funcionais, estruturais, moleculares e celulares
• Beneficiário: Vanessa Bomfim Cardoso
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto