Estudos funcionais e estruturais sobre o transportador do tipo ABC de sulfato em Xanthomonas citri: Functional and Structural analysis about sulfate ABC transporter in Xanthomonas citri

Autor(es)

Cristiane Tambascia Pereira

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2017-12-12

Membros da banca

Andrea Balan; Alessandra Alves de Souza; Jörg Kobarg; Adriana Santos Soprano; Rita de Cássia Café Ferreira

• Orientador: Andrea Balan

Resumo

Xanthomonas citri sp. citri (X.citri) é um fitopatógeno causador do cancro cítrico. Esta doença causa importantes perdas para economia brasileira já que o país é um dos maiores exportadores do suco de laranja e não há uma forma efetiva de controle dessa doença. Em X. citri, pouco se conhece sobre a captação de íons, incluindo sulfato, elemento essencial para o crescimento celular em todas as formas de vida. Em estudos prévios, foi mostrado que o transportador de alta afinidade do tipo ABC de sulfato e a via de assimilação do mesmo estão completos em X. citri e que são ativados durante o crescimento in vitro e in vivo. Com a finalidade de continuar esses estudos, este trabalho propôs a caracterização funcional e estrutural do transportador ABC de sulfato SbpCysUWA. A análise estrutural foi limitada à proteína periplasmática Sbp, uma vez que as permeases e ATPase não foram expressas mesmo após inúmeras tentativas. O domínio periplasmático Sbp, teve sua estrutura resolvida a 1.14 Å na presença do íon, o que permitiu a caracterização do bolsão de ligação e seus resíduos e análises biofísicas determinaram sua afinidade ao íon. Por outro lado, os estudos funcionais realizados com um mutante de X. citri portador de deleção do gene cysU (que codifica uma das permeases) e bloqueia o poro de entrada do sulfato mostraram que houve diminuição na produção de goma xantana e xantomonadina, não houve interferência no crescimento bacteriano in vitro e nem na formação do biofilme. Adicionalmente, infecções de folhas de cinco variedades de citros mostraram que a deleção afeta o período de infecção, mas não o fenótipo do cancro. Estes dados sugerem que outros transportadores do tipo ABC, de alta afinidade, como os de alcanosulfonados Ssu(1) e Ssu(2), caracterizados pelo grupo neste período, poderiam complementar a carência do enxofre, mas não a captação de sulfato. Adicionalmente, foram identificadas e caracterizadas três proteínas de X. citri com função putativa de carreadores de íons, mas de baixa afinidade. Com ensaios de RT-PCR mostramos que os genes de todos estes transportadores são transcritos em meio XAM1 (o qual mimetiza as condições de infecção) e a proteína putativa de captação e regulação de sulfato, Sac1 não é expressa em meio rico LB ON. Estes dados mostram que a bactéria possui e utiliza de todos os seus recursos para manter os níveis de enxofre durante o seu crescimento. Finalmente, este trabalho abriu uma série de perspectivas para futuros estudos sobre estes transportadores, tanto do ponto de vista funcional como estrutural para melhor compreensão da regulação da importação de íons no fitopatógeno (AU)

• Processo FAPESP: 13/16094-4 - Estudos Funcionais e Estruturais sobre o Transportador do tipo ABC de Sulfato em Xanthomonas citri
• Beneficiário: Cristiane Tambascia Pereira
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado