Efeito da laserterapia de baixa potência e do fator de crescimento epidérmico sobre a indução do metabolismo celular em superfícies de titânio e zircônia

Autor(es)

Taisa Nogueira Pansani

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Araraquara. 2019-11-18.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Faculdade de Odontologia. Araraquara
• Data de defesa: 2019-10-29
• Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa; Fernanda Gonçalves Basso

Resumo

A fixação do tecido conjuntivo à superfície dos abutments de implantes dentários impede a migração apical do epitélio juncional e previne a reabsorção da crista óssea normalmente ocasionada pela inflamação peri-implantar, o qual promove comprometimento estético e o sucesso do procedimento reabilitador. O uso de terapias para favorecer a adesão celular, a fim de induzir um selamento biológico efetivo, pode melhorar as condições estéticas e funcionais nas reabilitações protéticas. O objetivo desta pesquisa foi avaliar o efeito da laserterapia de baixa potência (LBP) e do recobrimento de superfícies de titânio (Ti) e zircônia (ZrO2) com fator de crescimento epidérmico (EGF), sobre a adesão e metabolismo de células da mucosa oral humana expostas ao estímulo inflamatório com o fator de necrose tumoral α (TNF-α). Fibroblastos de gengiva e células epiteliais foram isolados e cultivados sobre discos de Ti e ZrO2, simulando o selamento biológico in vitro. Nos grupos com EGF, este fator de crescimento foi aplicado sobre as superfícies de Ti e ZrO2 previamente ao cultivo celular. Após a semeadura das células, estas foram irradiadas 3 vezes com LBP (LaserTABLE, InGaAsP, 780±3nm), em intervalos de 24 h, nas doses de 0,5 J/cm2; 1,5 J/cm2 e 3,0 J/cm2, de acordo os grupos estabelecidos e então, o TNF-α foi aplicado sobre as mesmas por 24 h. Foram realizadas as análises de rugosidade da superfície dos discos por Microscopia Confocal (n=8) e de liberação do EGF dos substratos recobertos, além da avaliação da adesão celular por fluorescência direta. A viabilidade celular (AlamarBlue, n=8), expressão gênica de IL-6, IL-8 e VEGF (qPCR, n=5), síntese de IL-6, IL-8 (ELISA, n=6), bem como a morfologia e adesão celular (MEV e Fluorescência, n=2) foram avaliados. Nos fibroblastos foi realizada cultura 3D em matriz de colágeno e avaliação morfológica em microscópio Confocal (n=2). Os dados quantitativos obtidos foram submetidos aos testes estatísticos de ANOVA complementado por Tukey ou Games-Howell ao nível de significância de 5%. Observou-se aumento da rugosidade média (Ra) após o recobrimento dos discos com EGF, porém com liberação imediata deste fator de crescimento e incorporação do mesmo após 1 h de contato com as células. Para todos os grupos experimentais observou-se aumento da viabilidade dos fibroblastos e das células epiteliais quando semeados sobre superfície de Ti comparados ao grupo controle. Quando as células foram semeadas sobre superfícies de ZrO2 apenas as células epiteliais tratadas com LBP apresentaram aumento na viabilidade. Maior síntese de IL-6 e IL-8 foram verificadas nos grupos tratados com TNF-α, sendo que as terapias testadas, especialmente a LBP na dose de 3,0 J/cm2 inibiu a expressão das interleucinas independente do tipo de células e superfície. Houve aumento na expressão gênica de IL-6 de ambas células tratadas com TNF-α semeadas sobre discos de Ti e ZrO2 com modulação negativa na síntese desta interleucina quando tratados com LBP e EGF. Resultados semelhantes foram observados para expressão de IL-8 pelas células epiteliais submetidas aos tratamentos com TNF-α e EGF. Também foi observado aumento na expressão gênica de VEGF pelos fibroblastos expostos ao EGF e submetidas à LBP com redução na expressão gênica de VEGF nos grupos expostos ao TNF-α. Independente dos grupos avaliados, houve espalhamento uniforme das células por toda superfície dos discos de Ti e ZrO2 quando realizada a MEV. Porém foi observado alterações no citoesqueleto das células na presença do estímulo inflamatório bem evidentes quando realizada cultura 3D de fibroblastos através da Microscopia Confocal. De acordo com as metodologias usadas neste estudo, foi possível demonstrar que o EGF e parâmetros específicos de LBP podem biomodular a resposta inflamatória celular, auxiliando na recuperação destas células quando expostas a agentes inflamatórios. (AU)

• Processo FAPESP: 15/19364-8 - Efeito da laserterapia de baixa potência e do fator de crescimento epidérmico sobre a indução do selamento biológico in vitro
• Beneficiário: Taisa Nogueira Pansani
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado