Estudo da imobilização de dendrímeros na construção de um imunossensor baseado em SPR para detecção de troponina T em diagnósticos iniciais de infarto

Autor(es)

Juliana de Fátima Giarola

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Química
• Data de defesa: 2020-03-26

Membros da banca

Lauro Tatsuo Kubota; Maria Valnice Boldrin; Lucio Angnes; Denize Cristina Favaro; William Reis de Araujo

• Orientador: Lauro Tatsuo Kubota

Resumo

As doenças cardiovasculares são a principal causa de morte no mundo, sendo 85% delas devido à acidentes vasculares cerebrais e infartos agudos do miocárdio (IAM). O IAM atinge as as idades e o diagnóstico preciso e tratamentos médicos adequados são fundamentais para aumentar a taxa de sobrevivência. Este trabalho de doutorado envolveu o estudo da imobilização de diferentes gerações de dendrímeros PAMAM(G3, G4 e G5) na construção de um imunossensor baseado em ressonância de plásmons de superfície (SPR) visando o diagnóstico de quadros iniciais de IAM, utilizando o biomarcador troponina T. O melhor desempenho do imunossensor foi obtido utilizando os dendrímeros PAMAM( G4) 0,1 mmol L¡1 , combinados à monocamada auto-organizada (SAM) de ácido 3-mercaptopropiônico (MPA - 1,0 mmol L¡1 ). Os anticorpos de captura (20 ¹g mL¡1 ) foram imobilizados sobre os dendrímeros e os sítios não-específicos presentes no imunossensor foram bloqueados com BSA (30 ¹g mL¡1 ) e etanolamina (1,0mol L¡1 pH 8,5) por 5 minutos. O valor de KD estimado (8,3 x 10¡7 mol L¡1 ) sugere uma elevada afinidade entre o anticorpo de captura empregado e a biomarcador, favorecendo uma maior detectabilidade. Estudos de repetibilidade indicaram uma boa precisão do imunossensor desenvolvido com desvio padrão relativo menor que 10%. A regeneração dos sítios de ligação dos anticorpos de captura foi realizada utilizando tampão acetato de sódio 0,01 mol L¡1 pH 4,8 com 0,1% de Tween 20, permitindo a reutilização do imunossensor por mais uma vez. Os resultados mais promissores para o imunossensor proposto foram obtidos utilizando o ensaio "sanduíche", empregando dois tipos de anticorpos secundários: monoclonais, com faixa de resposta de 5,0 ¡ 300 ng mL¡1 e LOD de 3,6 ng mL¡1 e policlonais, com faixa de resposta de 3,0 ¡ 30 ng mL¡1 e LOD de 0,98 ng mL¡1 , ambos com um tempo de resposta de aproximadamente 30 minutos. Esses valores de LOD são muito próximos aos valores encontrados na corrente sanguínea de pacientes com quadros iniciais de IAM, podendo o imunossensor desenvolvido, ser empregado para este diagnóstico. A aplicação do imunossensor foi realizada em amostras de soro humano de pacientes saudáveis, por meio da recuperação de troponina T adicionada à matriz (88% a 104%), indicando resultados confiáveis nessa determinação. Outra aplicação foi realizada em amostras de pacientes com quadros iniciais de IAM, em que o valor obtido pelo imunossensor indicou resultados próximos ao método de imunoensaio por eletroquimioluminescência (ECLIA). Assim, os resultados obtidos neste trabalho de tese são substanciais para a contribuição no diagnóstico rápido de quadros iniciais de IAM, bem como no desenvolvimento de novas metodologias sensíveis à troponina T com custos reduzidos (AU)

• Processo FAPESP: 16/08166-3 - Desenvolvimento de um imunossensor eletroquímico baseado em fluxo lateral para detecção de marcadores cardíacos
• Beneficiário: Juliana de Fátima Giarola
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado