Síntese e avaliação de criogel monolítico contendo grupo epóxi reativo com o-fosfo-l-tirosina para adsorção de IgG e seus fragmentos

Autor(es)

Camila Marcuz

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Engenharia Química
• Data de defesa: 2019-08-01

Membros da banca

Sonia Maria Alves Bueno; Gisele Luiza Pavan Pereira; Everson Alves Miranda

• Orientador: Sonia Maria Alves Bueno

Resumo

As imunoglobulinas G (IgG) são expressas pelo sistema imunológico de seres vertebrados. Devido à alta especificidade da IgG e seus fragmentos, essas biomoléculas são empregadas em diversas aplicações médicas, farmacêuticas e analíticas. Tais aplicações requerem preparações homogêneas desta imunoglobulina e, por serem tradicionalmente obtidas a partir do soro, plasma ou do sobrenadante de cultura celular, processos efetivos de purificação são fundamentais, acarretando em alto custo para obtenção do bioproduto. Seu elevado custo tem impulsionado os avanços em técnicas cromatográficas, principalmente as de cromatografia de pseudobioafinidade, devido à possibilidade de obtenção do produto com alto grau de pureza, menor custo e reduzido número de etapas. Aliado a isso, a introdução de leitos monolíticos poliméricos como suporte sólido para imobilização do ligante, agregou uma série de vantagens ao processo cromatográfico de purificação. Esses suportes podem ser sintetizados com diferentes monômeros e, quando obtidos pela técnica de criopolimerização, apresentam macroporos interconectados proporcionando fluxo predominantemente convectivo, sendo essa sua principal vantagem. Com isso, o presente trabalho teve como objetivo sintetizar um criogel monolítico a base dos monômeros de acrilamida e alginato de sódio e os agentes reticulantes alil glicidil éter e bisacrilamida (PAAm-Alg-AGE), com o ligante pseudobioespecífico o-fosfo-L-tirosina (OPT) imobilizado (PAAm-Alg-AGE-OPT), e testar este adsorvente na purificação de IgG a partir do soro humano bem como na separação de seus fragmentos proteolíticos Fab e Fc. Em experimentos de purificação de IgG, a seletividade do adsorvente em diferentes condições cromatográficas foi avaliada por eletroforese SDS-PAGE. Na separação de fragmentos, a seletividade foi avaliada por eletroforese SDS-PAGE, Western Blot e imunodifusão radial. Os resultados indicaram que o adsorvente foi seletivo à IgG presente em soro humano na presença de Tris-HCl e Hepes, ambos a 10 e 25 mmol/L e pH 7,0. Curvas de ruptura indicaram capacidade de adsorção dinâmica de 24,91 ± 2,41 e 22,24 ± 0,21 mg de proteína total/g seca de criogel em Tris-HCl 10 mmol/L e Hepes 25 mmol/L, respectivamente, sendo também efetivo na separação entre os fragmentos Fab e Fc. Por imunodifusão radial, foi obtido adsorção de 73,61% e 82,61% dos fragmentos Fab alimentados em Tris-HCl 10 mmol/L e Hepes 25 mmol/L, respectivamente. O conjunto dos resultados apresentados evidenciaram o potencial em utilizar o ligante OPT imobilizado ao criogel monolítico de PAAm-Alg-AGE como leito fixo para purificação de IgG humana e seu fragmento Fab, por técnicas de cromatografia líquida de adsorção (AU)

• Processo FAPESP: 17/21751-5 - Adsorção de IgG humana em criogel monolítico de acrilamida/alginato com o-fosfotirosina (OPT) imobilizado
• Beneficiário: Camila Marcuz
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado