Determinação de meio de cultura favorável e período de incubação espermática de amostras seminais astenozoospérmicas

Autor(es)

Caroline Ranéa

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina (FM/SBD)
• Data de defesa: 2020-11-27

Membros da banca

Jorge Hallak; Paula Intasqui Lopes; Marcilio Nichi

• Orientador: Jorge Hallak

Resumo

O objetivo deste estudo foi padronizar o período ideal de incubação espermática \"in vitro\", e determinar o meio de cultura favorável para o espermatozoide. Foram incluídas 82 amostras seminais astenozoospérmicas, as quais foram divididas em dois protocolos distintos [protocolo I (n=28) e protocolo II (n=54)]. No protocolo I, as amostras a fresco (sem utilização de meio de cultura - T0) foram incubadas a 36,6ºC em atmosfera de 5% de CO2 durante 4 períodos: T1 (1 hora), T2 (2 horas), T3 (3 horas) e T4 (4 horas). No protocolo II, as amostras foram processadas pelo método gradiente descontínuo de densidade ou lavagem simples e em seguida, foram incubadas por 2 horas (período definido pelo protocolo I) em diferentes meios de cultura comercialmente disponíveis: a) Fluído Tubário Humano (do inglês Human Tubal Fluid - HTF®) + 15% Soro Substituto Sintético (do inglês Serum Substitute Supplement - SSS®), b) Meio de Cultura para Uso Contínuo (do inglês Continuous Single Culture Medium - CSCM®) + 10% Albumina Sérica Humana (do inglês Human Serum Albumin - HSA®), c) meio de Lavagem para o Espermatozoide (do inglês Sperm Rinse - SR®) + frutose e carnitina, d) Meio de Gametas para Fertilização In Vitro (do inglês Gametes in Vitro Fertilization - G-IVF®) + frutose + 15% SSS®. Parâmetros seminais e testes funcionais [análise espermática assistida por computador (SCA®), dosagem de radicais livres de oxigênio (ROS), avaliação da integridade do DNA (SCSA®), atividade mitocondrial dos espermatozoides (DAB)] foram analisados caracterizando os grupos pré e pós-incubação. Para análise estatística utilizamos Análise de variância (ANOVA), coeficiente de Correlação de Pearson, teste T de Student e adotamos P<0.05. No protocolo I, observamos aumento significativo na motilidade progressiva dos espermatozoides (T2; P<0,003) incubados durante 2 horas quando comparados com T1, T3 e T4. Além disso, no protocolo II podemos inferir que os meios de cultura CSCM® e G-IVF® são adequados para cultura de células espermáticas humanas, visto que trouxeram benefícios para motilidade dos espermatozoides (Motilidade Progressiva (MP) P < 0,001 e Motilidade Total (MT) P=0,025 vs. MP P=0,023) respectivamente. Para os demais meios de cultura, não observamos diferença significativa. Em conclusão, amostras seminais astenozoospérmicas encaminhadas para técnicas de Reprodução Humana Assistida, podem serem incubadas por 2 horas com meio de cultura CSCM® + HSA®, a fim de melhorar a porcentagem de motilidade dos espermatozoides (AU)

• Processo FAPESP: 17/03599-1 - Determinação e padronização de meio de cultura favorável para incubação espermática
• Beneficiário: Caroline Ranéa
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado