Desenvolvimento de tecnicas moleculares para o diagnostico diferencial do virus da bronquite infecciosa e do pneumovirus aviario

Autor(es)

Regina Celia Freitas D'Arce

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2004-12-13

Membros da banca

Clarice Weis Arns; Maria Silvia Viccari Gatti; Paulo Michel Roeche; Jose Antonio Jerez; Alda Maria Backx Noronha Madeira; João Pessoa Araujo; Marcelo Brocchi

• Orientador: Clarice Weis Arns

Resumo

O presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento de técnicas moleculares diferenciais para o diagnóstico do Vírus da Bronquite Infecciosa (VBI), responsável por infecções respiratória e urogenital agudas, altamente contagiosas em frangos e galinhas, e do Pneumovírus Aviário (PVA), agente etiológico da Rinotraqueíte dos Perus e associado à Síndrome da Cabeça Inchada (SCI) em galinhas. Sorotipos do VBI e subtipos do PV A foram cultivados em ovos embrionados e em células CER (Chicken Embryo Related), respectivamente. Foram adaptadas as técnicas de extração do RNA viral, RT -PCR, nested-PCR subtipo-especmco. para o PVA e RT -PCR-RFLP para o VBI a partir dos vírus cultivados, sendo testadas posteriormente em material coletado de aves infectadas experimentalmente. Tanto o PVA como o VBI foram detectados por RT-PCR e/ou nested-PCR nos grupos infectados com os agentes isoladamente ou em co-infecção, principalmente nos dias 3 e 6 pós-inoculação. As técnicas diagnósticas desenvolvidas foram então utilizadas na detecção viral de materiais clínicos, obtidos de plantéis avícolas com histórico de problemas respiratórios e sorologia positiva para os agentes estudados. Para o PVA obteve-se a detecção de oito vírus de campo, todos pertencentes ao subtipo A, donde foi possível o isolamento de quatro amostras. No caso do VBI foram detectadas três amostras de campo, todos diferenciados da amostra vacinal por RFLP, dos quais isolou-se duas amostras em ovos embrionados. Amostras positivas tiveram seus fragmentos de PCR seqüenciados, confirmando a classificação obtida através da nested-PCR para o PVA e do RFLP para o VBI. A análise das seqüências do VBI mostrou que os isolados de campo diferem de todos os sorotipos descritos até o momento. As técnicas molecu1ares otimizadas nesse estudo confinaram sua capacidade em diferenciar os subtipos A e B do PV A, bem como as variantes detectadas de VBI de campo e o sorotipo vacinal, demonstrando ser adequadas alternativas diagnósticas e valiosas ferramentas para estudos de epidemiologia molecular (AU)

• Processo FAPESP: 00/06934-5 - Desenvolvimento de técnicas moleculares para o diagnóstico diferencial do vírus da bronquite infecciosa e do pneumovírus aviário
• Beneficiário: Regina Celia Freitas D'Arce
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado