Utilização da tecnica HPLC/APCI-MS/MS para determinação e identificação de danos ao DNA

Autor(es)

Renato Haddad

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas
• Data de defesa: 2004-12-11

Membros da banca

Nelci Fenalti Höehr; Cláudio Francisco Tormena; Eduardo Cesar Meurer; Leonardo Silva Santos; Roberto Rittner Neto

• Orientador: Nelci Fenalti Höehr; Marcos Nogueira Eberlin

Resumo

o acúmulo de danos oxidativos ao DNA vem sendo proposto como um dos responsáveis pelo envelhecimento e por doenças neurodegenerativas como a doença de A1zheimer. Estudos de danos oxidativos vêm sendo realizados com o objetivo de elucidar diversas doenças como a predisposição ao câncer e os processos de envelhecimento, uma vez que a formação de radicais livres dentro das células, causa lesões cuja natureza química ainda é pouco conhecida. Este estudo permitiu o desenvolvimento de uma nova metodologia de análise utilizando a cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas sequencial com Ionização Química a Pressão Atmosférica (HPLC/APCI-MS/MS) para identificação das lesões oxidativas ao DNA. Foram adquiridos espectros de massas (APCI-MS e APCI-MS/MS) das bases oxidadas de DNA para verificar os padrões de fragmentação destas bases. Após a realização dos testes de linearidade, estudos iniciais com sistemas mais simples, oligonuc1eotídeos comerciais foram realizados para testar a aplicabilidade da técnica de HPLC/APCI-MS/MS. Estudos "in vivo" com culturas de células [PC-12, feocromocitoma de rato (fibroblastos)], foram realizados. Estas células foram irradiadas com Luz Fluorescente por 2, 4 e 6 horas e analisadas após exposição. Nós observamos a formação de cinco das seis bases de DNA foxidadas analisadas [8-0HGua, sss-Diamino-5-(formamido)-pirimidina (Fape-Ade), m5-Hidroxiuracila (5-0H -Uracila), 5-Hidroximetiluracila (5-0HMe- Uracila), Diidrotimina] lmostrando assim que a técnica desenvolvida é apropriada para este tipo de análise, recebendo bons níveis de detecção e sensibilidade (AU)

• Processo FAPESP: 01/05888-2 - Utilização da técnica ESI-MS (espectrometria de massas com ionização por electrospray) para determinação e identificação de danos ao DNA
• Beneficiário: Renato Haddad
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado