Caracterização de terminadores e promotores para otimização do fluxo metabólico de xilose em Saccharomyces cerevisiae linhagem industrial PE-2

Autor(es)

Gabriel Vieira Santello

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2016-12-05

Membros da banca

Gonçalo Amarante Guimarães Pereira; Juliana Velasco de Castro Oliveira; Anderson Ferreira da Cunha

• Orientador: Gleidson Silva Teixeira; Gonçalo Amarante Guimarães Pereira

Resumo

Avanços biotecnológicos introduziram recentemente mudanças em muitos setores da indústria a fim de promover o uso de recursos renováveis para produzir moléculas de relevância econômica, tais como o etanol. O uso de biomassa vegetal para a produção de combustíveis renováveis tem atraído muita atenção, mas a viabilidade de tal processo depende do desenvolvimento de organismos geneticamente modificados capazes de consumir eficientemente açúcares de 5 carbonos abundantes nesse material e tolerar estresses ambientais decorrentes processo. Para alcançar estes propósitos, a engenharia das vias metabólicas e adaptação das linhagens modificadas às condições industriais irá requerer a regulação precisa da transcrição de genes de interesse através do uso de novas e eficientes combinações de promotores e terminadores. O objetivo deste trabalho foi identificar promotores adequados para a alta expressão de genes durante a fermentação de glicose e xilose e caracterizar terminadores para uma melhor eficiência traducional na linhagem industrial PE-2 de Saccharomyces cerevisiae. No estudo de promotores, os genes que exibiram os dez maiores valores de expressão e a menor variação entre os experimentos estão relacionados com a glicólise, tolerância ao estresse e formação de parede celular. Curiosamente, os resultados da análise de qPCR mostraram que os níveis de transcrição na maioria destes genes selecionados foram diferencialmente regulados durante a fermentação em glicose e xilose, sugerindo bons candidatos para a expressão de genes exclusiva em uma única fonte de carbono ou em ambas (PGK1p, TEF1p, TDH1p, SCW4p e CDC19p), além de possibilitar um melhor controle de vias gênicas heterólogas. Os resultados para terminadores mostraram que três dos terminadores proporcionam uma maior atividade do que o terminador CYC1t (SPG5t, IDP1t e HIS5t) e sugerem que a eficiência dos terminadores é linhagem-dependente (AU)

• Processo FAPESP: 14/05724-0 - Caracterização de terminadores e promotores para otimização do fluxo metabólico de xilose em Saccharomyces cerevisiae linhagem industrial PE-2
• Beneficiário: Gabriel Vieira Santello
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado