Efeito da super-expressão do miR-195 na carga de microRNAs presentes em vesículas extracelulares secretadas por células de melanoma humano e na regulação da sensibilidade ao tratamento alvo-dirigido via transferência horizontal de informação

Autor(es)

Nathalia Leal Santos

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina (FM/SBD)
• Data de defesa: 2021-12-06

Membros da banca

Roger Chammas; Diana Noronha Nunes; Fátima Solange Pasini; Eduardo Moraes Rego Reis

• Orientador: Roger Chammas; Luciana Nogueira de Sousa Andrade

Resumo

O melanoma é classificado como o tipo mais agressivo do câncer de pele. A terapia alvodirigida combinada, com inibidores de BRAF e MEK, considerada a opção terapêutica padrão para o tratamento de pacientes em estágios avançados que possuem mutação em BRAF, resulta em uma taxa de sobrevida em 5 anos de apenas 20%. A transferência de informações via Vesículas Extracelulares (VEs) tem sido descrita como um dos mecanismos capazes de modular os processos de resistência e progressão maligna. No melanoma, a presença de moléculas antitumorais em VEs está associada a maiores taxas de resposta ao tratamento e melhores prognósticos. O miR-195, considerado um supressor tumoral, é down-regulado em melanomas e sua superexpressão resulta na diminuição da proliferação celular e aumento da sensibilidade à quimioterapia com agentes alquilantes e inibidores de BRAF. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da superexpressão de miR-195 na carga de VEs liberadas por células de melanoma e o papel destas partículas na regulação da sensibilidade de células naive a terapia alvo-dirigida combinada. Diferentes linhagens de melanoma humano (A375, SKMel-05, SKMel-28 e UACC-62) foram transfectadas com o miR-195, resultando no aumento da concentração de VEs liberadas, as quais apresentaram menor tamanho em relação ao controle. Análises de expressão gênica por RT-qPCR mostraram que a transfecção de miR-195 induz o aumento da expressão de GTPases envolvidas na biogênese de exosomos, enquanto genes envolvidos na produção de microvesículas têm sua expressão diminuída. VEs secretadas por células transfectadas com este miRNA foram capazes de transferir seu efeito citostático, induzindo a expressão de genes antiproliferativos, como CDKN1A e CDKN3, e diminuindo a Página | 2 expressão de genes pró-proliferativos, como CCND1 e YAP1, em células naive. VEs contendo miR-195 também impactaram o crescimento tumoral in vivo, diminuindo a cinética de crescimento dos tumores. Além disso, o tratamento com VEs miR-195 foi capaz de aumentar a sensibilidade de células naive a terapia alvo-dirigida combinada, resultando em maior expressão de BAD, menor expressão de BCL2L1 e consequentemente maior porcentagem de morte celular, além da diminuição do potencial clonogênico das células. Adicionalmente, com relação ao mecanismo de regulação de miR-195, dados do TCGA mostraram maiores níveis de metilação deste miRNA em melanomas em relação a tecidos saudáveis, entretanto, sua expressão foi restaurada após o tratamento das células com Azacitidina em apenas uma das três linhagens testadas. Análises in silico mostraram que diversos lncRNAs capazes de inibir miR195 encontram-se superexpressos em melanoma, representando outro possível mecanismo de down-regulação. Em resumo, a superexpressão de miR-195 representa uma estratégia promissora para sensibilizar células de melanoma a terapia via transferência horizontal de informação (AU)

• Processo FAPESP: 19/07278-0 - Efeito da super-expressão do miR-195 na carga de microRNAs presentes em vesículas extracelulares secretadas por células de melanoma humano e na regulação da sensibilidade ao tratamento alvo-dirigido via transferência horizontal de informação
• Beneficiário: Nathalia Leal Santos
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado