Terapia com esferoides de células-tronco de polpa dentária humana após avulsão de raízes motoras medulares em ratos adultos

Autor(es)

Sabrina Moreira Paes

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2021-10-22

Membros da banca

Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira; Bruno de Siqueira Mietto; Marimélia Aparecida Porcionatto

• Orientador: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira

Resumo

Lesões traumáticas medulares resultam em déficits neurológicos graves e grande perda neuronal, com consequente dificuldade de reparo e recuperação funcional. Neste sentido, as células-tronco mesenquimais têm apresentado resultados promissores no tratamento deste tipo de lesão, além de conduzirem a uma regeneração nervosa satisfatória, não alcançada com os métodos convencionais de tratamento. Tendo em vista suas múltiplas aplicações no âmbito da medicina regenerativa e aos resultados promissores obtidos com a terapia celular, o objetivo deste trabalho foi comparar o potencial neuroprotetor e indutor de regeneração axonal de células tronco de polpa dentária humana (hDPSCs) cultivadas em monocamada (2D) ou em esferoides (3D), após avulsão e reimplante de raízes motoras medulares em ratos adultos. Para tal, 72 ratas Lewis fêmeas adultas foram divididas em 4 grupos: Avulsão (AV); Avulsão associada a reimplante com selante de fibrina (AV + R); Avulsão associada a reimplante e terapia celular 2D (AV + 2D) e Avulsão associada a reimplante e terapia celular 3D (AV + 3D), sob aprovação da Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA/UNICAMP; protocolos: 5355-1/2019 e 5713-1/2021). A aplicação das células em 2D e 3D foi realizada por meio de microcirurgia, em modelo de avulsão de raízes motoras medulares, com posterior avaliação funcional por meio de teste de marcha (sistema Catwalk), até a décima segunda semana de sobrevida. Avaliou-se, por imunohistoquímica, a expressão de GFAP (marcador astrocitário), Iba-1 (marcador microglial) e sinaptofisina (marcador sináptico), bem como a sobrevivência neuronal 4 e 12 semanas pós-cirúrgicas por meio da coloração de Nissl. Houve também a análise de expressão gênica, com uma semana de sobrevida, dos transcritos para iNOS, Arginase 1, IL-6, VEGF?, TGF?, TNF?, IL-4 e GDNF, por meio de qRT-PCR. Quanto à sobrevivência neuronal, os animais dos grupos AV + 3D e AV + 2D foram os que apresentaram as maiores taxas, sendo de 70 e 65% respectivamente (Reimplante + 3D: 0,71 ± 0,06; Reimplante + 2D: 0,65 ± 0,03; razão ipsi/contralateral, média ± EPM). Nos grupos AV + 3D e AV + 2D, a imunofluorescência revelou redução na expressão de GFAP (Reimplante + 3D: 1,52 ± 0,05; Reimplante + 2D: 1,50 ± 0,17) e Iba-1 (Reimplante + 3D: 1,84 ± 0,14; Reimplante + 2D: 1,60 ± 0,13) e preservação de sinaptofisina (Reimplante + 3D: 0,8073 ± 0,01; Reimplante + 2D: 0,75 ± 0,01), indicando redução da reatividade de astrócitos e microglia, além de manutenção de inputs sinápticos nesses grupos. Quanto à expressão gênica, houve aumento estatisticamente significativo de expressão de transcritos para fatores anti-inflamatórios (IL-4, TGF?) e redução de mRNA para fatores pró-inflamatórios (IL-6, TNF?) nos animais tratados com reimplante e hDPSCs. Os fatores iNOS e Arginase 1 apresentaram transcritos aumentados de modo estatisticamente significativo no grupo reimplante + 2D indicando favorecimento da migração e atuação celular ante a lesão. Quanto à recuperação funcional, em todos os parâmetros analisados, o grupo AV + 2D foi o que apresentou diferença estatisticamente significativa em relação ao grupo AV (p=0,0019). Os resultados permitem inferir que a terapia celular associando o reimplante com selante de fibrina e hDPSCs cultivadas em monocamada é superior ao reimplante isolado e ao reimplante com hDPSCs em 3D. Futuras análises buscarão compreender os mecanismos envolvidos na diferença de potencial regenerativo das hDPSCs quando em cultivo 2D e 3D (AU)

• Processo FAPESP: 19/17402-0 - Terapia com esferóides de células tronco de polpa dentária humana após avulsão de raízes motoras medulares em ratos adultos
• Beneficiário: Sabrina Moreira Paes
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado