Estudo dos fatores de virulencia de amostras de Escherichia coli isoladas de cães com diarreia e normais: caracteristicas de intiminas produzidas, detectaveis pela reação em cadeia da polimerase (PCR)

Autor(es)

Gerson Nakazato

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2001-05-16

Membros da banca

Antonio Fernando Pestana de Castro; Tania Aparecida Tardelli Gomes do Amaral; Lucila Costallat Ricci

• Orientador: Antonio Fernando Pestana de Castro

Resumo

Amostras de Escherichia coZi enteropatogênicas (EPEC) são uma das causas importantes de diarréia aguda em cães,. principalmente nos neonatos. Neste trabalho foram. Estudadas amostras fecais de 137 cães com diarréia e 34 cães normais, de várias faixa etárias e diferentes localidades do Estado de São Paulo. Através da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), o gene eae foi encontrado em amostras de E. co/i isoladas de 22 cães, sendo 19 de cães com diarréia e 3 normais. Também através do teste de PCR, amostras de E. colí de 2 cães (com diarréia) apresentaram o gene bfpA. Nenhuma destas 22 amostras fecais, apresentou o plasmídio EAF, e genes que codificam enterotoxinas (ST e LT) ou citotoxinas (Stx e CNF). Utilizando iniciadores específicos, entre as 22 amostras fecais eae positivas, 7 amplificaram com iniciadores para intimina ß, 5para y, 1 para a, 1 para 8 e uma amostra para 13 e .., (colônias diferentes). Sete amostras não reagiram com nenhum destes iniciadores (não-tipáveis).Em relação a inserção de LEE ("Locus of Enterocyte Effacemenf') , através de PCR, algumas amostras apresentaram ÚlSerção de LEE em selC (amplificação da junção direita e esquerda do LEE com selC). Em outras LEEpode estar inserido em pheU (pheU inteITompido). E também, foi observado que E. coZi de 7 amostras fecais LEE estaria inserido em uma outra região do cromossomo ainda desconhecida (selC e pheU intacto). Utilizando cultura de células, foi verificado que a maioria das amostras aderiu em células HEp-2 (14 amostras) e HeLa (12 amostras), sendo que a adesão mais predominante foi do tipo localizada..like (LAL) (8 amostras em HEp.2 e 7 em HeLa). Para o teste de "Fluorescence Actin Staining" (F AS), 10 amostras eae positivas (que apresentaram adesão positiva em HEp-2) foram testadas. Em todas as amostras examinadas foram observados acÚIDulo de actina nos pontos de adesão da bactéria às células, portanto sendo consideradas como positivas no teste de FAS. As amos1ras eae positivas apresentaram uma grande variabilidade em relação a sorotipagem. Os soro grupos encontrados foram: 04, 011, 015, 025, 055,088,098,0111,0119,0125,0142,0156,0157,0167,0174 e ONT. Os sorotipos 01l1:H25, 0119:H2, 055:H7 e O142:H6, isolados neste trabalho, também são encontrados em amostras de EPEC de origem humana. Analisando estes dados foi constatada a presença de amostras EPEC em cães com diarréia e normais (conhecidas como "Dog" EPEC - DEPEC). Levando-se em conta que os fatores de virulência encontrados nestas amos1ras são muito semelhante as das EPEC humanas, e verificando-se a sorotipagem de algumas amostras, estes cães poderiam servir como possível fonte de infecção para o homem e vice-versa. A presente pesquisa é original e inédita nas Américas com exceção do Canadá constituindo-se em todos os seus aspectos a primeira constatação no Brasil da ocorrência de amostras DEPEC e suas respectivas características, incluindo a pesquisa dos genes eae, bfpA, plasmídio EAF, sub-tipos de intiminas, inserção do LEE e genes que codificam a pordução de enterotoxinas (8Ta, 8Th, LT-I e LT-II) ou citotoxinas (Stx, CNF) (AU)

• Processo FAPESP: 98/03065-4 - Estudo dos fatores de virulência em amostras de Escherichia coli, isoladas de cães com diarréia e normais: características de intiminas produzidas, detectáveis pela reação da polimerase (PCR)
• Beneficiário: Gerson Nakazato
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado