Influencia do fator idade na modulação da resposta de celulas do ligamento periodontal induzida pelo fator de crescimento basico de fibroblastos (bFGF)

Autor(es)

Bruno Braga Benatti

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Odontologia de Piracicaba
• Data de defesa: 2007-06-27

Membros da banca

Francisco Humberto Nociti Junior; Giuseppe Alexandre Romito; Poliana Mendes Duarte; Reginaldo Bruno Gonçalves; Karina Gonzales Silverio

• Orientador: Francisco Humberto Nociti Junior

Resumo

O objetivo deste trabalho foi investigar a influência do fator idade sobre o comportamento e expressão gênica de células do ligamento periodontal (CLPD), e quais alterações o tratamento com fator de crescimento básico de fibroblastos (bFGF) pode induzir nestas populações celulares. Culturas primárias de CLPD foram obtidas e divididas nos seguintes grupos experimentais: A ¿ inclusos (células obtidas de terceiros molares inclusos de voluntários entre 18 e 30 anos de idade), B ¿ jovens (células obtidas de pré-molares erupcionados de voluntários entre 15 e 20 anos de idade), C ¿ idosos (células obtidas de dentes erupcionados de voluntários acima de 60 anos de idade), D ¿ grupo A submetido ao tratamento com 10?g/ml de bFGF, E ¿ grupo B submetido ao tratamento com 10?g/ml de bFGF e F ¿ grupo C submetido ao tratamento com 10?g/ml de bFGF. Foram realizados ensaios de proliferação e viabilidade celular, mineralização, quantificação dos níveis de proteína total e do padrão de expressão dos seguintes genes: Colágeno tipo I e III, metaloproteinase (MMP)-2 e -8, inibidor tecidual de metaloproteinase (TIMP)-1 e ¿2, fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF)-1, proteína morfogenética óssea (BMP)-3, bFGF, osteoprotegerina (OPG), receptor ativador do fator nuclear kß ligante (RANKL), interleucina (IL)-1ß, IL-4, IL-6, IL-8 e receptor de fator de crescimento de fibroblasto (FGFR) 1 por meio da técnica de ¿real-time¿ PCR (PCRq). A análise dos resultados demonstrou que a idade diminuiu a taxa de proliferação celular e a formação de nódulos minerais (P<0,05), enquanto que não se observou efeito significativo da idade sobre a viabilidade celular e quantidade total de proteína secretada (P>0,05). Já na análise de expressão gênica observou-se que a idade diminuiu significativamente os níveis de RNAm para colágeno tipo I e IL-4, enquanto que para os genes FGFR1, MMP-8, TIMP-1, OPG e IL-1ß e 6, observou-se um aumento nos níveis de RNAm (P<0,05). O tratamento com 10?g/ml de bFGF aumentou a taxa proliferativa em todos os grupos (P<0,05), entretanto com menor intensidade nas células de idosos (P<0,05). Já a formação de nódulos minerais foi inibida pelo fator crescimento em todos os grupos experimentais (P<0,05), enquanto que a viabilidade celular e quantidade total de proteína secretada não foram afetadas (P>0,05). Na avaliação do padrão de expressão gênica, os resultados demostraram que o tratamento com bFGF, diminuiu nos níveis de RNAm para todos os genes (P<0,05), com excessão da TIMP-1 e IL-8 que aumentaram (P<0,05), BMP-3 que aumentou nas células de jovens e diminui nas células de idosos (P<0,05), e PDGF-1 que não foi afetada (P>0,05). Dentro dos limites do estudo, podemos concluir que: i) foi possível estabelecer culturas primárias de células do ligamento periodontal obtidas de pacientes jovens e idosos, ii) a idade pode modular propriedades importantes das CLPD, diminuindo seu potencial de regeneração de estruturas minerais além de exacerbar características pró-inflamatórias e de degradação da matriz extracelular e iii) o tratamento com 10?g/ml de bFGF induz alterações similares no comportarmento de CLPD independentemente da idade do doador (AU)

• Processo FAPESP: 04/14362-2 - Influência do fator idade na modulação da resposta de células do ligamento periodontal induzida pelo fator de crescimento básico de fibroblastos (bFGF)
• Beneficiário: Bruno Braga Benatti
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado