Texto completo
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| Autor(es): |
Márcia Ometto de Mello Alves José
Número total de Autores: 1
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| Tipo de documento: | Tese de Doutorado |
| Imprenta: | Piracicaba. |
| Instituição: | Universidade de São Paulo (USP). Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALA/BC) |
| Data de defesa: | 2002-11-27 |
| Membros da banca: |
Marcio de Castro Silva Filho;
Antonio Vargas de Oliveira Figueira;
Goran Neshich;
Aparecida Sadae Tanaka;
Michel Georges Albert Vincentz
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| Orientador: | Marcio de Castro Silva Filho |
| Resumo | |
Os inibidores inibidores de serino proteinases do tipo Bowman-Birk (BBI) possuem dois sítios ativos e são encontrados em plantas das famílias Fabaceae e Poaceae. Neste trabalho foi apresentada a estrutura primária e o padrão de expressão de 14 seqüências expressas (EST, expressed sequence tags) de BBI putativos encontradas no banco de dados do "Projeto Transcriptoma da Cana-de-açúcar" (SUCEST). Estas quatorze seqüências foram utilizadas em conjunto com outras 87 seqüências de BBI previamente descritas e depositadas no banco de dados "GenBank" para a construção de árvores filogenéticas da família BBI. A análise filogenética mostrou que os BBI de monocotiledôneas e dicotiledôneas podem ser claramente separados em diferentes grupos e a topologia das árvores filogenéticas sugere um padrão evolutivo diferente das famílias de BBI em plantas. Os inibidores de dicotiledôneas são bem conservados e acumularam diferenças sutis durante a evolução. Em contrapartida, os inibidores de monocotiledôneas são altamente variáveis, indicando a ocorrência de um processo evolutivo interessante, baseado em eventos de duplicação intragênica e mutação. Dois inibidores de serino proteinases, um de tripsina e outro de quimotripsina, derivados do gene que codifica o inibidor Bowman-Birk de soja, foram expressos na superfície do fago filamentoso M13 e utilizados para a construção de bibliotecas de variantes. Para tal foram feitas mutações em quatro aminoácidos do sítio ativo destes inibidores e duas bibliotecas de expressão na superfície de fagos filamentosos foram construídas. Posteriormente, estas bibliotecas foram utilizadas para a seleção de variantes que melhor interagiam com a tripsina bovina e de Diatraea saccharalis e com as enzimas digestivas presentes no extrato intestinal desta praga. Os variantes selecionados foram seqüenciados, analisados e caracterizados. Os resultados mostraram que a técnica de expressão na superfície de fagos filamentosos foi eficiente para selecionar novos inibidores. Além disto, com as mutações realizadas, foi possível transformar a alça de inibição de quimotripsina em uma alça de inibição de tripsina. (AU) | |
| Processo FAPESP: | 98/15534-9 - Construção, seleção e caracterização de variantes do gene que codifica o inibidor de proteinase do tipo Bowman-Birk de soja contra a tripsina da Broca-da-cana (Diatraea saccharalis) |
| Beneficiário: | Marcia Ometto de Mello Alves José |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Doutorado |