Transformação genética de Citrus sinensis (L.) Osbeck para resistência a Candidatus Liberibacter ssp

Autor(es)

Eveline Carla da Rocha Tavano

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Piracicaba.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Centro de Energia Nuclear na Agricultura (CENA/STB)
• Data de defesa: 2013-02-19

Membros da banca

Adriana Pinheiro Martinelli; Helvecio Della Coletta Filho; Francisco de Assis Alves Mourão Filho

• Orientador: Beatriz Madalena Januzzi Mendes

Resumo

A doença Huanglongbing (HLB) associada a bactéria Candidatus Liberibacter spp., que coloniza os vasos do floema, é considerada uma das mais graves doenças de citros. Uma importante estratégia para o controle desta doença consiste na produção de plantas transgênicas, expressando genes que codificam peptídeos antibacterianos especificamente no local de colonização do patógeno. O objetivo deste trabalho foi obter plantas transgênicas de laranja doce, expressando o gene que codifica o peptídeo antibacteriano atacina A (attA) dirigido por promotores específicos para a expressão gênica no floema. O trabalho foi iniciado com a elaboração de construções gênicas contendo o gene attA (associado ou não ao peptídeo sinal), sob o controle dos promotores AtSuc2 (transportador de sacarose), AtPP2 (proteína de floema 2), clonados de Arabidopsis thaliana, ou CsPP2 (proteína de floema 2), clonado de Citrus sinensis. Os experimentos de transformação genética foram realizados com C. sinensis cv. \'Hamlin\', \'Valência\', \'Pêra\' e \'Natal\', via Agrobacterium tumefaciens, utilizando-se segmento de epicótilo como explante. A identificação de plantas transgênicas foi realizada por meio da análise de PCR. Plantas PCR+ foram aclimatizadas e transferidas para casa-de-vegetação específica para o cultivo de plantas transgênicas. Análises de Southern e Northern blot foram realizadas em plantas aclimatizadas, confirmando-se a integração e transcrição do gene attA, respectivamente. A expressão do gene attA também foi confirmada pela análise de RT-qPCR. Plantas de laranja \'Hamlin\' contendo o gene attA (associado ou não ao peptídeo sinal), sob o controle dos promotores AtSuc2 ou AtPP2 foram propagadas por enxertia, para futura avaliação da resistência a Candidatus Liberibacter asiaticus (AU)

• Processo FAPESP: 08/10426-7 - Transformação genética de Citrus sinensis (L.) Osbeck para resistência a Candidatus Liberibacter ssp
• Beneficiário: Eveline Carla da Rocha Tavano
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado