MÉTODO PARA CLONAGEM, EXPRESSÃO E PURIFICAÇÃO DO POLIPEPTÍDEO AMILÓIDE DAS ILHOTAS PANCREÁTICAS HUMANAS

"MÉTODO PARA CLONAGEM, EXPRESSÃO E PURIFICAÇÃO DO POLIPEPTÍDEO AMILÓIDE DAS ILHOTAS PANCREÁTICAS HUMANAS". Método para clonagem e expressão do polipeptídeo das ilhotas pancreáticas (IAPP) maduro humano sob a forma recombinante, utilizando um sistema de expressão heteróloga em Escherichia coli baseado no promotor Lacl-T7 RNA polimerase, no qual um fragmento de DNA que contém a seqüência que codifica o peptídeo maduro de IAPP é amplificado por transcrição reversa e reação em cadeia da DNA polimerase (RT-PCR) a partir de RNA total derivado de ilhotas pancreáticas humanas, clonado em vetor de expressão como descrito acima e expresso em bactérias, e método de purificação empregando-se as etapas de lise das células, centrifugação do meio e resuspensão do precipitado em presença de agente desnaturante, centrifugação da solução, remoção do material insolúvel, coleta e filtração do sobrenadante clarificado, ligação da proteína a coluna de afinidade contendo íons metálicos imobilizados, clivagem com protease e eluição da rh-IAPP em forma purificada.