Estudo do proteoma com inserção genômica do 4-nerolidilcatecol em Potomorphe umbellata (Piperaceae)

Resumo

Em trabalho precedente (FAPESP-98/16545-4), o estudo biossintetico do 4-nerolidilcatecol (4-NC) presente em Potomorphe umbellata foi realizado através da incubação do nerolidol e do acido 3,4-diidroxibenzoico em extratos enzimáticos de folhas. A enzima apresentou uma melhor atividade em pH 5,5 e na presença dos cofatores piridoxal-5-fosfato e MgCI2. A biossintese da parte terpênica também foi avaliada, uma vez que um caminho alternativo na biossintese de difosfato de isopentenila (IPP) foi recentemente descoberto. Foram realizados experimentos utilizando-se D-glicose-[U-14C], gliceraldeido-3-fosfato-[U-14C] e mevalonolactona-2-14C, sendo que se observou a incorporação destas três substancias no 4-NC. Para a confirmação da rota biossintetica foram realizados experimentos de incorporação de glicose-1-[13C]. Os resultados mostraram que a biossintese das unidades isoprenicas seguem as duas via metabólicas. Com base nos resultados obtidos, pretende-ser purificar a(s) enzima(s) envolvida(s) na biossintese do 4-NC através do uso das mais variadas técnicas cromatográficas, enquanto que para as analises será empregando eletroforese em gel 2D e técnicas de proteoma (MALDI-ToF). Será investigado também a compartimentalização da biossintese do IPP, assim como deslocamento destas unidades de um compartimento celular para o outro. (AU)