Atividade da fosfolipase A2 secretada humana do grupo IID (hsPLA2-IID) contra membranas artificiais e biológicas

Resumo

As fosfolipases A2 (PLA2s) são enzimas envolvidas em uma ampla variedade de processos fisiológicos que compreendem digestão fosfolipídica, remodelagens de membrana, regulação do sistema imunológico e processos patofisiológicos. As PLA2s secretadas do grupo II (sPLA2gII) são proteínas do sistema imune presentes na resposta de fase aguda e na atividade bactericida, participando na ativação e liberação de citocinas e de outros mediadores pré-inflamatórios. Recentemente foi demonstrado, em nosso laboratório, que PLA2 do grupo IIA humana (hsPLA2-IIA) tem atividade de danificação de membrana e efeito bactericida independentes do cofator Ca+2 e, portanto independente da atividade catalítica. Apesar dos estudos recentes sobre os efeitos farmacológicos das hsPLA2-IIA, pouca atenção terá sido dada à sPLA2 do grupo IID humana (hsPLA2-IID), uma proteína associada ao progresso do processo inflamatório. No presente projeto, pretende-se investigara contribuição da atividade catalítica da hsPLA2-IID no efeito sobre membranas e na desgranulação de mastócitos. Este estudo será a primeira abordagem sobre a atividade bactericida de hsPLA2-IID e outros efeitos biológicos como a interação com membranas artificiais. A seqüência codificadora da proteína será clonada no vetor pET3a, e mutantes (H48Q e D49K) serão produzidos com o intuito de eliminar a atividade catalítica da enzima As proteínas heterólogas do tipo selvagem e mutantes serão expressas em Escherichia coli (E. coli) e após enovelamento será avaliado o efeito das mutações sobre a atividade bactericida, a desgranulação de mastócitos e a atividade danificadora de membranas artificiais independentes de Ca+2. (AU)