Análise de genes e proteínas relacionados à ativação e ao ciclo celular em gametas e embriões bovinos

Resumo

O desenvolvimento de um organismo a partir do zigoto envolve uma série de divisões celulares precisamente reguladas. Sabe-se que a qualidade do oócito é o fator primário para o sucesso da produção de um embrião. No entanto, as características moleculares deste oócito de boa qualidade, ou seja, quais transcritos, em que momentos são sintetizados e qual a quantidade ideal para suportar os eventos da maturação, fecundação, ativação e desenvolvimento embrionário inicial ainda não são conhecidas completamente. Além dos transcritos derivados do oócito, muito pouco se sabe a respeito do papel do espermatozóide na fecundação, na formação do zigoto, bem como no desenvolvimento embrionário inicial. Na fecundação, o oócito de mamíferos é ativado pelo espermatozóide. A interação espermatozóide-oócito provoca a hidrólise do fosfolipídio de inositol no oócito, resultando na produção do diacilglicerol (DAG) e do inositol 1,4,5-trifosfato (IP3), que conduz à liberação de Ca2+ do retículo endoplasmático para o citoplasma. Depois de liberado no citoplasma, o Ca2+ pode ativar o oócito por duas vias. A primeira inclui a ativação da proteína quinase C (PKC) pelo Ca2+ e pelo DAG e a segunda a ativação da proteína quinase dependente de calmodulina (CaM-quinase) somente pelo Ca2+. Diversos estudos descrevem o papel da PKC e da CaM-quinase na liberação dos grânulos corticais, na retomada da meiose, na inativação do MPF e da MAPK, na reorganização do citoesqueleto e na formação do fuso mitótico durante a ativação do oócito tanto na fecundação quanto na ativação partenogenética. Contudo, estas vias de sinalização não estão completamente compreendidas. Desta forma, o presente projeto tem como objetivo avaliar a função da PKC e da CaM-quinase na ativação do oócito pela fecundação e caracterizar temporalmente e quantificar os transcritos das ciclinas A, B, D e E, das CDKs 1, 2, 4 e 6 e da proteína Rb, relacionados ao ciclo celular e à ativação embrionária, em gametas e embriões bovinos. Pretende-se com isto fornecer subsídios para maior a compreensão do papel dos gametas nas primeiras etapas do desenvolvimento embrionário, visando a melhora da produção in vitro de embriões. (AU)