Caracterizacao funcional de jazigo: uma nova proteina formina que participa da morte celular programada durante o desenvolvimento de drosophila melanogaster.

Resumo

Esta proposta tem como objetivo caracterizar molecular e funcionalmente o gene jazigo, selecionado em um prévio "screen" genético que visava a identificação de mutações que interferissem em processos de morte celular durante o desenvolvimento de Drosophila melanogaster. A proteína codificada por jazigo apresenta alto grau de homologia com proteínas componentes da família de Forminas. As forminas estão envolvidas no remodelamento do citoesqueleto em distintos processos biológicos, tais como divisão celular, tráfego vesicular, polaridade celular, e foram conservadas evolutivamente. Nossos estudos preliminares mostraram que jazigo é expresso em diferentes tecidos que sofrem morte celular e que mutações baseadas na inserção de elementos P no lócus jazigo produzem fenótipos defectivos (paralisação) do processo de morte celular que é controlado por esteróides durante o desenvolvimento. Essas mutações são letais em homozigose e passíveis de reversão por excisão do elemento P, demonstrando a importância de jazigo na regulação/execução desse processo. Em Drosophila, esteróides disparam respostas estágio e tecido-específicas a sua presença e controlam a morte celular pela indução de uma série de genes de resposta inicial e tardia, incluindo os genes envolvidos na execução da morte celular. A transcrição de jazigo é seletivamente regulada por esteróides durante o desenvolvimento e, portanto mostra comportamento similar a outros genes de morte celular. Esses dados constituem a primeira evidência experimental da participação de forminas em processos de morte celular. Dos aspectos comentados acima, principalmente, a) o impacto de mutações em jazigo sobre a morte celular, b) a significância biológica das forminas no remodelamento do citoesqueleto, c) a regulação de jazigo por hormônios esteróides e o d) potencial de Drosophila como modelo biológico em estudos in vivo sobre a função de novos genes, nos estimulam a caracterizar jazigo funcionalmente a fim de determinar sua função como uma formina e sua participação na execução dos processos de morte celular durante o desenvolvimento. Para tal produziremos animais transgênicos visando o "knock-out" in vivo e a expressão ectópica de jazigo, avaliaremos o impacto de alterações de sua expressão gênica sobre o remodelamento do citoesqueleto, por meio de análise sob microscopia confocal, e utilizaremos experimentos de hibridação in situ e PCR em tempo real no intuito de determinar seu padrão temporal e espacial de expressão durante a embriogênese e metamorfose de Drosophila. (AU)