Desenvolvimento de metodologias analiticas para avaliacao de calcio, ferro e zinco ligados a proteinas de tecidos muscular e hepatico de tilapia do nilo (oreochromis niloticus)

Resumo

A determinação de cálcio, ferro e zinco ligados a proteínas de amostras de tecido hepático e muscular de peixes da espécie tilápia do Nilo por espectrometria de absorção atômica em chama/forno de grafite (FAAS/GFAAS) após fracionamento das proteínas por eletroforese 2D-PAGE, representa o foco principal do trabalho proposto. O estudo de avaliação de metaloproteínas na área nutrição de peixes além de inédito, será um marco inicial na determinação da metalômica da espécie Tilápia do Nilo. O trabalho busca otimizar métodos eletroforéticos em 2D para o fracionamento de proteínas nas amostras de tecidos hepático e muscular de Tilápia do Nilo para identificação dessas proteínas por análise das imagens obtidas nos géis de poliacrilamida. Um estudo de mapeamento por SR-XRF dos spots protéicos para identificação qualitativa de íons Ca, Fe e Zn será feito em seguida, para então, otimizar procedimentos de extração desses íons metálicos dos spots para quantificação por FAAS/GFAAS. As proteínas presentes nos spots onde foram detectados/quantificados os íons metálicos de interesse serão caracterizadas por MALDI-TOF MS. Diferentes formas de preparo das amostras para extração das proteínas e diferentes programas de separação por eletroforese 2D-PAGE, serão avaliadas. Na determinação de Ca, Fe e Zn por FAAS/GFAAS, além do preparo das amostras utilizando a mineralização ácida dos spots protéicos em forno de micro-ondas, será estudada a possibilidade da extração dos analitos metálicos por ultra-som. Nesses estudos, diferentes tempos e potências de agitação ultra-sônica serão avaliados. As determinações serão feitas utilizando-se éspectrômetros de absorção atômica SHIMADZU modelo AA-6800. A proposta de trabalho, além de possibilitar a avaliação de metaloproteínas em amostras do tecido hepático e muscular da espécie Tilápia do Nilo, poderá também trazer informações importantes para a área de fisiologia e genética de peixes em relação aos estudos do proteoma e metaloma dessa espécie. (AU)