Ação da butirolactona I e da roscovitina na maturação de oócitos bovinos e suas implicações na resistência à criopreservação

Resumo

Este trabalho tem como objetivo averiguar o efeito da butirolactona I e roscovitina para bloquear temporariamente a retomada da meiose, atuando sobre os fatores que controlam o ciclo celular meiótico de oócitos bovinos e a expansão das células do cumulus oophoros. Deste modo, este projeto parte da hipótese de que a adição destes fármacos durante a maturação oocitária influenciará positivamente a produção de embriões e que este efeito induzirá uma melhor resposta a vitrificação. Os diferentes grupos de oócitos serão avaliados quanto a: 1) maturação oocitária e expansão das células do cumulus; 2) expressão das proteínas do MPF (p3cdc2 e ciclina B1) e MAPK em oócitos; 2) capacidade dos oócitos submetidos ou não ao bloqueio da meiose pré-maturação em se desenvolver em embriões viáveis e 3) resistência a vitrificação dos embriões obtidos. Na parte I todos os oócitos de abatedouro serão maturados in vitro nos grupos: G1: Grupo controle; G2: Grupo tratado com butirolactona I por 12 horas; G3: Grupo tratado com BLI com por 24 horas; G4: Grupo tratado com roscovitina com por 12 horas; G5: Grupo tratado com roscovitina com por 24 horas; G6: Grupo tratado com a associação de BL I (100 µM) e ROS (25 µM) por 12 horas, seguida de 22 horas de MIV e G7: Grupo tratado com a associação de BL I (100 µM) e ROS (25 µM) por 24 horas, seguida de 22 horas de MIV. Serão produzidos embriões in vitro, a partir dos oócitos de todos os grupos, utilizando-se meio SOFaa acrescido por 5mg/mL de BSA e 2,5% de SFB, fertilizados e cultivados in vitro. No D7 será avaliada a taxa de formação de blastocisto, o índice de apoptose. Em seguida, os embriões do D7 produzidos serão vitrificados pelo método conhecido como "Cryotop" (Vitri-Ingá®, Ingamed). Após aquecimento os embriões serão então lavados e cultivados em meio SOFaa acrescido por 5mg/mL de BSA e 2,5% de SFB. O índice de apoptose será avaliado antes e após o processo de vitrificação/aquecimento. Na parte II será avaliado o efeito da adição dos fármacos na maturação in vitro (MIV) de oócitos bovinos de acordo com os grupos descritos na parte I, bem como a produção das proteínas ligadas ao MPF dos oócitos e a expansão das células do cumulus.