Produção e caracterização de anticorpos recombinantes scFv anti-toxinas de venenos botrópico e crotálico

Resumo

Nosso objetivo neste projeto é produzir e caracterizar anticorpos contendo o fragmento variável de cadeia única (do inglês: single chain Fragment variable) scFv anti-toxinas de venenos de serpentes, visando o entendimento dos mecanismos de ação e uma possível alternativa terapêutica para envenenamento por picada de serpentes do gênero Crotalus e Bothrops. Os acidentes por venenos ofídicos foram incluídos na lista de Doenças Tropicais Negligenciadas da OMS. No Brasil, segundo dados do Ministério da Saúde, ocorreram, no ano de 2009, mais de 22,7 mil acidentes com serpentes. Destes, o gênero Bothrops está envolvido em 90% e o gênero Crotalus 8%. Entretanto, os acidentes crotálicos apresentam a maior letalidade (1,9%). Anticorpos humanos scFv obtidos por phage display contra a crotoxina, principal toxina do veneno crotálico e três mutantes, gerados por estudos in silico, serão construídos e expressos em E. coli. A seguir, serão purificados e testados quanto à sua afinidade (por ressonancia plasmonica de superfície - Biacore) e quanto à capacidade de neutralizar as atividades fosfolipásica, miotóxica e de desgranulação de mastócitos induzida pela crotoxina. Além destes, anticorpos scFv murinos, oriundos de anticorpo monoclonal contra uma metaloproteinase do veneno botrópico também serão construídos, expressos e testados quanto a capacidade de neutralização das atividades fibrinolítica, enzimática e inflamatória induzidas pela BnP1 (de Bothrops neuwiedi). Anticorpos com atividade neutralizante poderão ser empregados como terapia complementar ao envenenamento, pois a terapia atual, embora muito eficiente na neutralização dos efeitos sistemicos, é pouco eficaz para os efeitos locais induzidos pelos venenos de serpentes. (AU)