Prospecção de marcadores genéticos para o estudo evolutivo de anuros do gênero Physalaemus

Resumo

A recente descoberta de populações relacionadas filogeneticamente aos táxons Physalaemus cuvieri e Physalaemus ephippifer, mas com grande diversidade citogenética e genética lança novos questionamentos acerca da evolução desses anuros. A presença de heteromorfismo sexual cromossômico na linhagem referente a P. ephippifer, ausente em outras linhagens do grupo, torna a investigação da delimitação de espécies especialmente intrigante nesse grupo. Nesse contexto, e considerando o grande potencial das tecnologias genômicas em estudos filogeográficos, a presente proposta surge como uma grande oportunidade de capacitação de nossa equipe na prospecção de novos marcadores para futuros estudos evolutivos do complexo P. cuvieri-P. ephippifer. Adicionalmente, novos esforços serão realizados na tentativa de ampliar a amostra de indivíduos em análise, especialmente para inclusão de exemplares de São Pedro da Água Branca-MA, população que já foi estudada citogeneticamente e se mostrou diferente das demais. Os novos indivíduos amostrados terão fragmentos dos genes mitocondriais 12S, 16S e RNAt-val sequenciados e serão incluídos nas análises filogenéticas e de distância genética já realizadas anteriormente. Para a prospecção de novos marcadores será utilizada a técnica de ddRAD-seq (double-digestion Restriction-site Associated DNA sequencing), que consiste no sequenciamento de bibliotecas de fragmentos de restrição gerados pela digestão com duas enzimas de restrição. Serão construídas bibliotecas a partir do material obtido de indivíduos representantes dos principais clados reconhecidos nas análises filogenéticas conduzidas anteriormente. Para atingir os propósitos aqui descritos, contaremos com a colaboração do Dr. Benjamin Fitzpatrick, pesquisador com grande expertise na análise de processos de especiação e hibridação, especialmente baseada em abordagem genômica.