Desenvolvimento, padronização e validação de reação em cadeia pela polimerase (PCR) em tempo real para diagnóstico da Brucelose Canina

Resumo

A brucelose é uma doença infectocontagiosa de caráter zoonótico, acomete várias espécies de animais. Atualmente são conhecidas dez espécies de Brucella que são divididas em dois grupos (lisase rugosas). A Brucella canis é uma das espécies que pertence ao grupo das brucelas rugosas. Essa espécie acomete cães, os quais podem apresentar problemas reprodutivos, gerando prejuízos econômico principalmente para os proprietários de canis, já que os animais podem facilmente ser infectados por via oral, inalação de aerossóis e pela via venérea. Vários métodos de diagnósticos foram desenvolvidos com o intuito de detectar infecções por B. canis, porém nem todos são eficientes. O cultivo microbiológico é o padrão ouro de diagnóstico, no entanto é um método oneroso, pode ocorrer contaminação com outros organismos, além de apresentar risco devido à manipulação de culturas de Brucella. Os testes sorológicos são bastante empregados, mas dependendo da fase da doença não são capazes de detectar a infecção, o que pode gerar resultados falsos-negativos. O método molecular utilizando PCR (reação em cadeia pela polimerase) convencional tem sido apontado como método de alta sensibilidade, sendo uma alternativa para o diagnóstico direto de brucelose nos cães. A PCR em tempo real, tende a apresentar maior sensibilidade e especificidade quando comparada à PCR convencional, além de maior rapidez na execução. Diante do exposto, o objetivo deste trabalho é desenvolver, padronizar e validar a PCR em tempo real para diagnóstico da brucelose canina causada por Brucella canis utilizando amostras de sangue total. As amostras utilizadas serão colhidas de cães pertencentes a canis comercias, os quais passarão por anamnese e avaliação clínica para verificar a presença de problemas reprodutivos. No total, serão utilizados 50 cães, sendo 25 infectados com Brucella canis e 25 sadios. O sangue será submetido a hemocultura e a técnica de PCR em tempo real, posteriormente os resultados serão comparados por meio do coeficiente Kappa e teste de McNemar. O teste de Qui-quadrado irá determinar a associação da presença de sinais clínicos sugestivos de brucelose e a positividade nos testes de hemocultura e PCR em tempo real. (AU)