Desvendando o papel de proteínas transitórias na composição molecular de chromatoid bodies de mamíferos: fibrilarina (proteína nucleolar) e CLOCK/ bmal1 (controle ciclo circadiano)

Resumo

O chromatoid body (CB) é estrutura citoplasmática de células germinativas masculinas que possui um papel na regulação da transcrição de RNAm durante a espermatogênese, além de participar no controle da expressão gênica por meio do comando da ação de pequenos RNAs não codificantes (RNAmi e RNApi). Estudos recentes têm demonstrado que todo esse metabolismo de RNAm mediado por pequenos RNAs não codificantes executado pelo CB é crucial para que o processo de espermatogênese progrida de maneira apropriada, garantindo a formação da célula reprodutora masculina madura. A análise proteômica completa desta estrutura identificou a presença abundante dos seus marcadores moleculares clássicos (MVH, MIWI, DDX25, TDRD6 eTDRD7), porém também identificou um grande número de proteínas transientes, ou seja, proteínas que possuem função/localização nuclear e que temporariamente se alojam no CB. Proteínas transientes que tem chamado a atenção de nosso grupo são: a proteína nucleolar fibrilarina (rRNA 2'-O-methyltransferase), e a proteínas CLOCK (circadian locomoter output cycles protein kaput) e BMAL1 (brain and muscle ARNT-Like 1) componentes moleculares do controle circadiano. O nucléolo é um subcompartimento do núcleo que possui a função principal de realizar a biogênese de ribossomos e estudos vêm demonstrando que o ciclo nucleolar durante a gametogênese contribui para o reestabelecimento da morfologia nucleolar durante a gametogênese, sendo um fator importante para remoção dos danos celulares induzidos pelo envelhecimento. Dessa maneira, o CB poderia estar participando desse ciclo nucleolar abrigando algumas proteínas que estariam sendo reorganizadas neste ciclo. Além disso, a identificação das proteínas CLOCK e BMAL1 na composição molecularde CBs; o fato de camundongos BMAL1 apresentarem esterilidade e alterações morfológicas no CB das células pós-meióticas são evidências que nos levam a tentar correlacionar o papel destas duas proteínas na fisiologia de CBs. Portanto, o objetivo do presente trabalho será testar duas hipóteses iniciais por meio da realização de experimentos que nos permitam evidenciar se a atividade nucleolar influencia na organização de CBs pós-meióticos e; verificar se as alterações morfológicas observadas em CBs de células pós-meóticas em camundongos BMAL1 KO são realmente produzidas pela ablação de BMAL1 no organismo ou se estão relacionadas com o processo de envelhecimento acelerado que esta ablação promove. (AU)