Clonagem e otimização das condições de expressão do cluster gênico LIC_11299 à LIC_11302

Resumo

A Leptospirose é uma doença infecciosa de distribuição e importância global e é causada pela espiroqueta Gram negativa Leptospira interrogans. A pessoa contaminada pela bactéria pode apresentar febre alta repentina, mialgias, cefaléia, mal-estar, meningite e pode causar problemas ao fígado e rins em casos mais graves, que pode levar a óbito do paciente. Na maioria dos casos, o desenvolvimento da doença é benigna e é observada uma melhora no quadro clínico em aproximadamente 7 dias. O projeto aqui apresentado tem como foco contribuir para o entendimento da rede de sinalização envolvendo o segundo mensageiro bacteriano c-di-GMP, importante por mediar o estilo de vida bacteriano e regular diferentes fenótipos, como: biofilme, motilidade, transcrição gênica entre outros. A proteína alvo de estudo neste projeto é a LIC_11300 que possui 5 hélices transmembranar na região N-terminal e um domínio GGDEF, predito por ser ativo, na região C-terminal da proteína. Análise de contexto gênico de LIC_11300 mostrou que as proteínas LIC_11299 a LIC_11302 formam um cluster e poderiam estar participando da mesma via de sinalização. De forma interessante, LIC_11301 também é integral de membrana e possui uma hélice transmembranar na sua região N-terminal, e um domínio germane na porção C-terminal. LIC_11302 pertence a família de proteínas da Haloacid dehalogenase que poderia atuar como uma pirofosfatase. O gene de LIC_11299 está apontada na direção oposta do gene LIC_11300 no genoma de L. interrogans e o que chamou a atenção é ela ser uma putativa lipoproteína. Desta forma, nossa hipótese é que os genes de LIC_11299 à LIC_11302 possam participar da mesma via de sinalização mediada pelo segundo mensageiro c-di-GMP. O projeto se dará a partir do estudo da interação entre as proteínas por meio de clonagem, expressão e análise dos resultados obtidos.