Desenvolvimento de métodos de Cromatografia Líquida acoplada à Espectrometria de Massas em tandem (LC-MS/MS) para monitoramento dos metabólitos de novas catecolaminas

Resumo

Propõe-se a detecção e quantificação de metabólitos da 6-nitrodopamina, 6-cianodopamina, 6-nitrodopa, 6-nitroadrenalina e 6-bromodopamina, novas catecolaminas endógenas descobertas recentemente em tecidos como cordão umbilical humano, ventrículos e átrios de coelhos e ratos, endotélio de cobras e anéis aórticos de tartaruga. 6-nitrodopamina também foi considerada como o agente inotrópico endógeno mais potente já descoberto em coração de ratos, sendo mais potente que a adrenalina e noradrenalina (mil vezes) e do que a dopamina (dez mil vezes). A substituição da posição 6 do anel benzênico da dopamina teoricamente resulta em metabólitos como ácido 6-nitrohomovanílico, 6-ciano homovanílico, 6-bromo homovanílico, análogos do ácido homovanílico, que é o bem conhecido metabólito da dopamina. Entretanto ainda não houve um estudo cromatográfico desses metabólitos, o que poderia esclarecer as rotas de fragmentação. Por exemplo, a separação cromatográfica do ácido 6-nitrohomovanílico do ácido 5-nitrohomovanílico elucidaria o mecanismo de formação das nitrodopaminas, já que o ácido 5-nitrohomovanílico só pode ser formado a partir da 3-nitrotirosina. A incubação das novas catecolaminas endógenas com enzimas tipo monoamino-oxidase A, monoamino-oxidase B e renalase também esclareceria qual espécie é metabolizada e qual o seu metabólito. Neste projeto, espera-se adotar estratégias cromatográficas para aumentar o poder de separação dos metabólitos dessas novas catecolaminas. Uma possibilidade de aumentar o poder de separação de metabólitos de polaridade parecida seria manipular o pH da fase móvel para promover a protonação seletiva de espécies com pKa alto, mantendo desprotonadas as espécies de pKa baixo, o que levaria à diferenciação por RPLC e por HILIC. Com isso espera-se desenvolver uma metodologia analítica para quantificação das novas catecolaminas em urina, plasma e liquor humano.