Purificação e caracterização de novas isoformas da enzima conversora de angiotensina I, fragmento N-terminal, em urina de crianças prematuras e termo: estudos de imunohistoquímica e PCR no modelo experimental de rato pré e pós-natal

Resumo

A enzima conversora de angiotensina I (ECA) é uma ectoenzima importante na regulação da homeostase vascular. Parte integrante do sistema renina-angiotensina a ECA converte a angiotensina I em angiotensina II que é um potente peptídeo vasoconstritor. Ao mesmo tempo, no sistema calicreína-cininas a ECA inativa a bradicinina que possui uma ação vasodilatadora. A ECA é largamente distribuída pelo organismo: células intestinais e células epiteliais do túbulo renal, nas células neuroepiteliais do sistema nervoso central, nas células mononucleares, nas células germinativas masculinas e nos fluidos corpóreos tais como urina, fluido cerebroespinal, sangue e fluido amniótico. Em 1995, Casarini e colaboradores encontraram duas formas da ECA na urina humana. Nos indivíduos adultos normotensos foram isoladas e caracterizadas ECA de alto peso molecular (170 kDa) e ECA de baixo peso molecular (fragmento N-terminal, 65 kDa). Nos indivíduos adultos hipertensos (hipertensão leve essencial) foram purificadas e caracterizadas duas formas de ECA de baixo peso molecular (90 kDa e 65kDa ambas sendo o fragmento N-terminal). Com esses dados e baseando-se no fato de que a nefrogênese é completada na 36° semana da gestação humana, o objetivo deste projeto é purificar e caracterizar as ECAs da urina de crianças prematuras e crianças nascidas a termo e verificar se a enzima de baixo peso molecular é encontrada na urina humana desde a idade prematura. Para a etapa de purificação das enzimas será coletada urina de prematuros e termos e o material será submetido a uma coluna de gel filtração (Ac A34). Na etapa de caracterização serão feitos estudos de inibição da atividade enzimática utilizando diferentes inibidores, influência do NaCI na atividade da enzima, influência do pH e determinação do Km. Também serão feitos estudos de imunohistoquímica e PCR. (AU)