Avaliação da proteína recombinante GP60 de Cryptosporidium hominis e da IgY policlonal anti-GP60 recombinante para uso em pesquisa e diagnóstico

Autor(es)

Valéria Chamas Miura ; Sérgio Moraes Aoki ^[2] ; Paulo Peitl Junior ^[3] ; Lilian Campos Pires ^[4] ; Priscila Dalmagro ^[5] ; Alex Akira Nakamura ^[6] ; Marcelo Vasconcelos Meireles ^[7]

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária; v. 26, n. 2, p. 205-210, 2017-06-22.

Resumo

Resumo Neste trabalho, foi desenvolvido um método de expressão da glicoproteína GP60 de Cryptosporidium hominis em Escherichia coli visando produzir anticorpos IgY anti-GP60 em galinhas para utilização em estudos futuros com os objetivos de diagnóstico, prevenção e tratamento da criptosporidiose. A sequência completa de nucleotídeos do gene gp60 de C. hominis foi códon-otimizada para expressão em E. coli e sintetizada no vetor pET28-a. A subclonagem foi realizada em várias estirpes diferentes de E. coli BL21. Os ensaios de concentração do indutor IPTG, temperatura e tempo foram realizados e analisados por SDS-PAGE. As condições ótimas de expressão foram observadas em temperatura de 37 °C, incubação durante a noite e 1 mM de IPTG. A purificação da proteína foi realizada por cromatografia de afinidade utilizando o sistema de cromatografia AKTA Pure e a coluna Hi-Trap™ HP (GE Healthcare). A proteína recombinante GP60 (rGP60) foi utilizada para imunizar galinhas poedeiras para produzir IgY policlonal anti-rGP60. Verificou-se por Western blot e por imunofluorescência indireta que o anticorpo policlonal apresentou reatividade com a rGP60 e com esporozoítos de Cryptosporidium parvum, respectivamente. A rGP60 e a IgY anti-rGP60 geradas neste estudo podem ser utilizadas como modelos para o desenvolvimento de ensaios para pesquisa e diagnóstico da criptosporidiose. (AU)

• Processo FAPESP: 13/06622-3 - Expressão e purificação das proteínas recombinantes GP60 de Cryptosporidium hominis e COWP6 de Cryptosporidium parvum visando à produção de IgY policlonal em galinhas para utilização em diagnóstico
• Beneficiário: Marcelo Vasconcelos Meireles
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular