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Reis, Ana Paula Carvalho ; Celestrino, Giovanna Azevedo ; Souza Siqueira, Talita ; Coelho, Milena De Melo Scarano ; Avila, Juliana Carreiro ; Pimentel, Isabela De Oliveira Cavalcante ; Iwai, Leo Kei ; Lalwani, Pritesh Jaychand ; Dos Reis, Vitor Manoel Silva ; Arriel, Kaique ; Lindoso, Jose angelo ; Benard, Gil ; Sousa, Maria Gloria Teixeira

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: BIOLOGY METHODS & PROTOCOLS; v. 10, n. 1, p. 6-pg., 2025-01-01.

Resumo

The skin is the largest organ in the body and is the site for a diverse set of diseases. Yet, given the complexity of the cutaneous tissue, there is a limited availability of data in the literature on skin proteomics. Here, we proposed an adapted and optimized protocol for the extraction of proteins from human skin, using a combination of chemical and mechanical lysis approaches. For this, we used of a lysis buffer containing 2% SDS, 50 mM TEAB, and a 1% protease and phosphatase inhibitor cocktail, in addition to Matrix A beads and a FastPrep-24 5G homogenizer. For the characterization of the samples, the obtained proteins were purified and digested using the SP3 method (Single-pot, solid phase, sample preparation), and analyzed by nano liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry. In this way, we were able to identify around 6000 proteins in the skin samples from healthy individuals and patients with the fungal infection sporotrichosis. Our improved methodology could significantly enrich our understanding of skin biology and provide new perspectives for the discovery of biomarkers and therapeutic targets for cutaneous diseases. (AU)

• Processo FAPESP: 22/12224-0 - Perfil proteômico nas lesões de pacientes com esporotricose
• Beneficiário: Ana Paula Carvalho dos Reis
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Processo FAPESP: 13/07467-1 - CeTICS - Centro de Toxinas, Imuno-Resposta e Sinalização Celular
• Beneficiário: Hugo Aguirre Armelin
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Centros de Pesquisa, Inovação e Difusão - CEPIDs
• Processo FAPESP: 24/05761-4 - Impacto da interação dos indóis produzidos por Malassezia spp. com o receptor de hidrocarboneto de aril de macrófagos na resposta imune de pacientes com pitiríase versicolor
• Beneficiário: Giovanna Azevedo Celestrino
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Processo FAPESP: 17/26208-8 - Dermatofitose crônica disseminada por Trichophyton rubrum: papel dos neutrófilos nos mecanismos efetores e na modulação da resposta adaptativa na infecção humana
• Beneficiário: Maria da Gloria Sousa Stafocker
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Jovens Pesquisadores
• Processo FAPESP: 16/16369-1 - Dermatofitose crônica disseminada por Trichophyton rubrum: papel dos neutrófilos nos mecanismos efetores e na modulação da resposta adaptativa na infecção humana
• Beneficiário: Maria da Gloria Sousa Stafocker
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Jovens Pesquisadores