| Texto completo | |
| Autor(es): |
Gabas, Mariana L.
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Otvos, Luca P.
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Almeida, Naira B. O.
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Farias, Sofia O.
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Val, Giovanna S.
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Machado, Luciana E. S. F.
Número total de Autores: 6
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| Tipo de documento: | Artigo Científico |
| Fonte: | Biochemical and Biophysical Research Communications; v. 799, p. 9-pg., 2026-02-05. |
| Resumo | |
Molecular cloning and heterologous protein expression are essential for investigating protein function and interactions with ligands such as small molecules, drugs, and other proteins. Studies on the redox regulation, intermolecular interactions, structural determination, and structural dynamics of mitochondrial protein phosphatases require high-yield expression of soluble, catalytically active enzymes. Accordingly, the aim of this study was to optimize the cloning, expression, and soluble purification of mitochondrial protein phosphatases in their monomeric and active forms. We designed 22 expression constructs encoding the mitochondrial protein phosphatases PTPMT1, PP2Cm, PPTc7, and PGAM5, incorporating variations with or without the mitochondrial targeting sequence (MTS) and solubility-enhancing fusion tags. Our results demonstrate that, for matrix localized phosphatases, MTS removal combined with a soluble fusion tag is essential for obtaining soluble, structurally stable, properly folded, and catalytically active proteins. In contrast, intermembrane space phosphatase PGAM5 was well structured and active across constructs, thoug MTS presence reduced expression yields and increased protein instability. Overall, this work underscores the critical role of rational construct design for the successful production of mitochondrial protein phosphatases suitable for in vitro biochemical and structural studies. (AU) | |
| Processo FAPESP: | 21/13213-9 - Regulação redox das proteínas fosfatases mitocondriais dependente de manganês e investigação das suas redes de interação |
| Beneficiário: | Naira Bellissimo Oliveira de Almeida |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Iniciação Científica |
| Processo FAPESP: | 22/02313-5 - Análise dos ligantes e da rede de interação da proteína fosfatase mitocondrial PGAM5 |
| Beneficiário: | Sofia de Oliveira Farias |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Iniciação Científica |
| Processo FAPESP: | 21/10474-6 - Identificação de ligantes das DUSPs mitocondriais através de ferramentas bioinformáticas |
| Beneficiário: | Luca Paulino Otvos |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Iniciação Científica |
| Processo FAPESP: | 20/10168-0 - Modulação estrutural e funcional das proteínas fosfatases mitocondriais pelo metabolismo redox e as implicações na biologia celular |
| Beneficiário: | Luciana Elena de Souza Fraga Machado |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Jovens Pesquisadores |
| Processo FAPESP: | 22/04064-2 - Clonagem, expressão e purificação das proteínas fosfatases mitocondriais |
| Beneficiário: | Mariana Louise Gabas |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico |
| Processo FAPESP: | 23/02968-4 - Regulação redox e estrutural da Proteína Tirosina Fosfatase Mitocondrial 1 (PTPMT1) |
| Beneficiário: | Luca Paulino Otvos |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Mestrado |
| Processo FAPESP: | 19/02605-3 - Modulação estrutural e funcional das proteínas fosfatases mitocondriais pelo metabolismo redox e as implicações na biologia celular |
| Beneficiário: | Luciana Elena de Souza Fraga Machado |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Jovens Pesquisadores |